罗格列酮对人乳腺癌mdamb231细胞的体外抗肿瘤作用论文

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1、罗格列酮对人乳腺癌MDAMB231细胞的体外抗肿瘤作用论文章涛余华荣杨贵忠刘颖菊杨俊卿蒋建新周岐新【摘要】目的：研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）激动剂罗格列酮对人乳腺癌细胞MDAMB231体外生长影响，以评价其在人乳腺癌治疗上的应用潜力.方法：噻唑蓝(MTT)法检测罗格列酮对MDAMB231细胞体外生长抑制作用；应用PPARγ拮抗剂GDAMB231细胞增殖影响与PPARγ受体关系；流式细胞仪分析细胞周期，AnnexinVFITC和TUNEL法检测细胞凋亡.结果：罗格列酮干预下MDAMB231细胞G0/G1期比例上升，而S期比例下降，

2、呈量效关系抑制其生长，IC50=5.2μmol/L.PPARγ拮抗剂GDAMB231细胞增殖抑制作用（P0.05）；100μmol/L罗格列酮还可诱导MDAMB231细胞凋亡，TUNEL法检测的凋亡率(18.4±3.1)%与AnnexinVFITC法检测的结果一致［(16.6±2.7)%］（P0.05）.结论：罗格列酮通过PPARγ介导.freeleproliferatoractivatedreceptorγ，PPARγ)激动剂已被广泛应用于糖尿病的临床治疗当中［1］.近年来的研究显示，TZD等PPARγ激动剂可抑制多种肿瘤细胞的增殖并促进其凋亡，激活P

3、PARγ受体极有希望成为治疗多种恶性肿瘤的新途径［2］.但目前为止，尚无罗格列酮对人MDAMB231乳腺癌细胞体外抗肿瘤的系统研究报道.鉴于此，我们就细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡等方面探讨罗格列酮对MDAMB231细胞的体外生物学效应，为未来临床抗肿瘤应用提供理论依据.1材料和方法1.1材料MDAMB231人乳腺癌细胞株购自中科院上海细胞库.罗格列酮购自重庆康尔威药业公司（批号:20051，纯度0.99）；四甲基偶氮唑蓝（MTT）、PPARγ受体拮抗剂GI1640培养基、小牛血清购自HyClone公司；其它试剂均为分析纯.Coultercounter细

4、胞计数仪（BeckmanCoulter公司）；Safire全波长酶标仪（TECAN公司）；FACSCalibur流式细胞仪（BectonDickinson公司）.由于罗格列酮和GSO制成0.1mol/L的母液，-20℃冰箱保存备用.1.2方法1.2.1细胞培养MDAMB231细胞培养于含100mL/L小牛血清的RPMI1640培养基中，常规加入青霉素（105U/L）与链霉素（100mg/L），于37℃,50mL/LCO2培养箱中培养.1.2.2MTT检测细胞增殖抑制率取对数生长期的MDAMB231细胞，计数并调整密度为1.2×108/L，以每孔100μL接种

5、于96孔板中培养，15h后更换培养基，设置对照组和不同浓度药物组（罗格列酮1×10-8，1×10-7，1×10-6，1×10-5，1×10-4mol/L），每组设8个复孔.继续培养24h后，加入10μLMTT（5g/L），继续孵育4h，弃上清，每孔加入100μLDMSO，振荡10min待结晶溶解，于酶标仪上测定570nm波长的A值，计算不同浓度罗格列酮对MDAMB231细胞的生长抑制率：细胞抑制率（%）=［1－试验组A570nm/对照组A570nm］×100％.将药物浓度的对数值和抑制率拟合后计算出IC50.试验重复3次.1.2.3细胞增殖能力检测取对数生长期细胞

6、，细胞计数并调整密度为5×107/L，以每孔1mL接种于6孔板中培养.第2日更换含不同药物组合的新鲜培养基，包括1mL/LDMSO,1μmol/L罗格列酮、5μmol/LG）检测群体细胞中G0/G1,S,G2/M各期细胞百分比.每个药物浓度做3个复孔，同时设不加药物的对照组.1.2.5AnnexinV/PI法流式细胞仪检测细胞凋亡细胞接种密度及用药同细胞周期检测.罗格列酮作用24h后消化收集细胞，PBS洗2遍，用100μL结合缓冲液重悬细胞，加5μLAnnexinVFITC和2.5μLPI，混均，避光于冰上孵育10min，PBS洗1次，400μL结合缓冲液重悬细胞，

7、细胞样品逐一上机检测，同一浓度设3个复孔，试验同时设置不加药物的空白对照组.1.2.6TUNEL法检测细胞凋亡将预铺多聚赖氨酸的盖玻片放入6孔培养板中，每孔接种3×105个细胞，第2日更换为含1×10-6，1×10-5，1×10-4mol/L3种不同浓度罗格列酮的新鲜培养基.药物作用36h后弃培养液，PBS洗1次，40g/L多聚甲醛室温固定25min，按照原位检测试剂盒说明操作，最后以DAB显色、甲基绿衬染，每个浓度作2个复孔.在高倍镜（×200）视野下，随机选取10个视野，以凋亡细胞在全部细胞中所占的比例计算凋亡率.统计学处理：实验数据以x±s表示