光动力疗法对人乳腺癌细胞mdamb231凋亡的影响

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1、光动力疗法对人乳腺癌细胞MDAMB231凋亡的影响：蔡君，叶青青，杨继元，李晶晶，周忠晓，黄卓正，刘剑【摘要】目的探讨光动力疗法(PDT)对人乳腺癌细胞凋亡的影响。方法以人乳腺癌细胞株MDAMB231为研究对象，以血卟啉衍生物(HpD)为光敏剂，以630nm波长激光为光源，采用连续照射的方式。将不同浓度HpD染色的MDAMB231细胞，照射不同剂量的激光后，用MTT法测定其A492值，选择最佳作用参数；电镜观察PDT作用后不同时间的细胞凋亡情况，并采用免疫组化方法检测促凋亡蛋白Bax和抗

2、凋亡蛋白Bcl2的表达情况。结果随着PDT作用后时间的延长，细胞凋亡现象越明显；Bax蛋白表达无明显变化(P>0.05)，而Bcl2蛋白表达自PDT后6h起显著下降(P<0.01)，PDT后6hBax/Bcl2比值依次递增，且有统计学意义(P<0.05)。结论光动力疗法可诱导人乳腺癌细胞发生凋亡，其机制可能与Bax和Bcl2蛋白表达的比值有关。【关键词】光动力疗法；乳腺肿瘤；细胞凋亡　　ABSTRACT:ObjectiveTostudytheeffectofphotodyn

3、amictherapy(PDT)onapoptosisinhumanbreastcancerlineMDAMB231.MethodsThecellsoporphyrinderivative,HpD)inusingthesuccessivelaserofdifferentdosagesat630nm.Cellviabilityeasuredorphologicallybyelectronmicroscope.ExpressionsofBaxandBcl2proteinsmunocytochemi

4、stry.ResultsCellapoptosisbecamemoreobviousastimeprolongedafterPDT.NoalterationintheexpressionofBaxesafterPDT(P>0.05).HoarkedlyincreasedastimeprolongedafterPDT(P<0.05).ConclusionPhotodynamictherapycaninducecellapoptosisofhumanbreastcancercells,and

5、themechanismmaybeassociatedictherapy;breastcancer;cellapoptosis　　细胞凋亡又称程序化死亡，常在胚胎发育、激素调节、免疫反应及某些物化刺激中发生。已有大量实验证实，Bax和Bcl2蛋白表达在细胞的凋亡中起着关键的作用[12]。光动力疗法(photodynamictherapy,PDT)对人乳腺癌细胞MDAMB231凋亡的影响文献报道鲜见。本研究通过观察PDT对人乳腺癌细胞凋亡的影响，进一步探讨PDT凋亡的作用机制，为PDT在乳腺癌

6、中的应用提供理论依据。　　1材料与方法　　1.1光敏剂及光源血卟啉衍生物(hematoporphrphyrinderivative,ＨpD)针剂：100mg/20mL，重庆华鼎药业公司出品，产品批号：030902。630PDT治疗仪，重庆雷高公司出品，波长630nm，输出功率≥2000mDAMB231由中山大学医学院引进，细胞培养技术参照司徒镇强等[3]介绍的方法进行。MDAMB231细胞常规在RPMI1640[含10%(体积分数)灭活的新生小牛血清、青霉素100u/mL、链霉素100mg/

7、mL]中培养。置于37℃、5%(体积分数)CO2孵箱中，饱和湿度。细胞培养密度为1×105-2×105/mL，每3-4d传代1次，取对数生长期细胞接种用于实验(免疫组织化学加盖玻片)。　　1.3实验分组及PDT处理实验分为如下4组：实验组(光敏剂＋照光)；光敏剂量对照组(单纯加光敏剂)；激光对照组(单纯照光)；空白对照组(不加光敏剂，不照光)。　　1.4MTT法测定MDAMB231细胞的吸光度值(A492)细胞经消化后，取一滴细胞悬液于血球计数板上计数，调细胞密度为1×105/mL，取100μL

8、接种于96孔培养板至细胞培养箱中培养24h。细胞贴壁后，将HpD用RPMI1640完全培养基分别稀释到实验所需的质量浓度：0、0.5、1、2、4mg/L。光照剂量为：0、1、5、10J/cm2，照射面积为29.26cm2，光斑直径为6cm，光照时间为10min。为了方便照射，每板只接受一种激光剂量，每组均设有5个复孔。细胞接种24h后弃去旧培养基，每孔加入不同浓度的HpD的完全培养基200μL，严格避光培养8h，使细胞对HpD的吸收达饱和。予不同剂量的激光照射后立即更