沉默cd147基因对人乳腺癌mda-mb-231细胞的影响

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1、万方数据AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterEffectofsiRNAMediatedDown—regulationofCD147OnHumanBreastCancerCellLineMDA．MB一231ByZhenqianLiSupervisor：Prof．DaomingLiPathologyandPathophysiologyBasicmedicalSch001March2014万方数据原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，

2、独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：压缸轴日期：ZD／参年莎月≥f日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用

3、影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：耋掘辛痧日期：欠田红年步月弓7日万方数据摘要沉默CDl47基因对人乳腺癌MDA．MB．231细胞的影响硕士研究生：李振乾导师：李道明教授郑州大学基础医学院病理学教研室河南省肿瘤病理重点实验室河南郑州450052摘要背景和目的乳腺癌是女性发病率最高的肿瘤，我国发病率为50．14／10万，且呈不断上升趋势。乳腺上皮细胞在多种致癌因子作用下发生基

4、因突变，癌细胞出现并恶性增殖使乳腺组织正常结构被破坏，挤压并侵蚀周围正常组织，甚至威胁生命。然而及早发现诊断、早期治疗的患者生存率显著提高。目前，随着分子生物和免疫学技术的不断进步，对乳腺癌认识不断深入，在其早期诊断和治疗方面也取得了一定的进展。CDl47是一种细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)，在人体细胞内分布广泛，涉及到不同的病理生理过程，其中主要作用是参与细胞间及细胞与基质问的黏附。肿瘤组织中CDl47异常激活，一方面可通过成纤维细胞刺激合成基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinase，MMPs

5、)，另一方面可与整合素作用家族形成蛋白复合物刺激MMPs的生成，进而降解Ⅳ型胶原，破坏细胞外基质，从而促进肿瘤的侵袭与转移。因此我们推测抑制CDl47的表达可能抑制乳腺癌的浸润和转移。金属基质蛋白酶组织特异性抑制剂(thetissueinhibitorofmetalloproteinase，TIMPs)能特异性抑制内源性的基质金属蛋白酶(MMPs)，其既可以与MMP．2形成复合物而使后者失活，又可以阻止MMP．2与细胞表面接触从而抑制其活性，对其具有双重阻滞作用。正常情况下，MMP／TIMP处于动态平衡状态。肿瘤癌变时MMP和TI

6、MP表达都上调，但TIMP上调程度不足以万方数据摘。要抑制MMP能力时，破坏ECM的动态平衡，促使肿瘤的浸润和转移。CDl47基因为目前研究的热点，但是国内外关于利用RNA干扰靶向CDl47基因研究乳腺癌的报道较少。本研究构建CDl47慢病毒表达载体，转染到乳腺癌MDA．MB．231细胞中，观察其对乳腺癌MDA．MB．231细胞生长、增殖、迁移能力以及对MMP．2和TIMP．2mRNA和蛋白表达的影响，然后建立裸鼠皮下乳腺癌移植瘤模型，观察CDl47siRNA对乳腺癌细胞成瘤的抑制作用。以此探讨CDl47作为乳腺癌的治疗提供新的有

7、效的靶点的可行性。方法1．免疫组化法检测MDA．MB．231细胞中CDl47、MMP．2、TIMP．2蛋白的表达。2．病毒滴度测定，构建CDl47siRNA慢病毒载体并转染各实验组MDA．MB．231细胞(空白对照组、阴性对照组、CDl47siRNA转染组)，采用RT-PCR和WesternBlot技术检测CDl47siRNA转染MDA．MB．231细胞后不同时间点CDl47mRNA和蛋白改变，确定最佳时间点。3．RT-PCR和WesternBlot技术分别检测CDl47siRNA转染MDA．MB．231细胞后MMP．2、TIMP

8、．2的mRNA和蛋白改变。4．CCK．8法和划痕实验分别检测转染后各组MDA．MB．231细胞的增殖和迁移能力的改变。5．细胞悬液法建立裸鼠皮下移植瘤模型，观察CDl47siRNA对裸鼠瘤体体重和体积的影响。6．统计学分析：SPSSl7．0软件处理