rna干扰沉默hif1α对人乳腺癌细胞功能的影响

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1、中国协和医科大学硕士研究生论文HIF一1aVEGFAra—cMCF一7RT—PCR常见英文缩写缺氧诱导因子一1Ⅱ短发夹RNA双链RNA小干扰RNA转录后基因沉默RNA诱导的沉默复合体RNA依赖的RNA聚合酶dsRNA依赖的蛋白激酶RNA酶L非编码区siRNA表达框架氯化钴实时定量PCR血管内皮生长因子阿糖胞苷人乳腺癌细胞系逆转录一多聚酶链反应撇MmscP舱sLRGSRARC献艘娅m吣腓嗽眦m锄眦中国协和医科大学硕士研究生论文RNA干扰胎牛血清磷酸盐缓冲液DNA标准分子量Marker焦碳酸二乙酯缺氧反应元件促红细胞生成素脯氨酸羟化酶氧依赖性降解结构域促葡萄糖转移子一l醛缩酶A

2、烯醇化酶1诱导型一氧化氮合酶多药耐药基因一1叔一丁基过氧化氢鼠胚胎纤维原细胞过氧化酶增殖体激活受体胚胎干细胞，bc卜A●01盼风ASrPEODUDOR酬F舶M麟

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4、室啪嘞咖驯枷啪m燃Ⅷ唧眦盼!里垫塑墨盟丕堂塑主翌墨兰丝塞RNA干扰沉默HIF．1Q对人乳腺癌细胞功能的影响中文摘要研究背景缺氧诱导因子一t(hypoxia_induciblefactor一1，HIF—1)是缺氧条件下产生的一种重要的转录因子，其诱导表达的基因与能量代谢、细胞周期阻滞、细胞生存与增殖、血管新生、血管舒缩、红细胞生成、肿瘤生长，转移以及肿瘤多药耐药等相关。多数肿瘤具有缺氧的微环境，在肿瘤形成过程

5、中一个关键的步骤是对缺氧的适应，HIF一1就在这个过程中发挥了重要的作用。HIF—l广泛存在于动物及人体的多种肿瘤细胞中，其活性对维持肿瘤细胞的能量代谢，血管新生，促进肿瘤增殖和转移起到重要作用，因此成为肿瘤治疗的重要靶点。新近发展起来的RNA干扰技术能够高效特异地沉默靶基因的表达，成为基因治疗的重要工具。目的研究靶向针对缺氧诱导因子1a(HIFln)的短发夹RNA(shRNA)对人乳腺癌细胞系McF一7细胞功能的影响。方法通过在细胞培养中加入150umol／L氯化钴(cocl。)模拟低氧环境。采用RNA干扰技术，构建靶向针对HI卜lo的shRNA真核表达载体，利用脂质体1

6、ipofactamine2000将shRNA真核表达载体转染入Mc卜7细胞中，经G418(400Hg／m1)筛选得到抗性克隆。McF-7细胞经150um01／L的cocl。处理24小时后，通过Rea卜timePcR和westernblot分别检测HIF一1Ⅱ的mRN^和蛋白水平的变化。AnnexinV／PI荧光标记检测细胞经150pmol／L的Cocl，处理24小时后姬F一7细胞凋亡的荧光标记检测细胞经150pm01／L的cocl：处理24，J、时后姬F一7细胞凋亡的中国协和医科大学硕士研究生论文变化。同样通过Rea卜timePCR和westernblot分别检测转染shR

7、NA后Mc卜7细胞中HIF-1QⅡ删A水平和蛋白水平的变化。30ug／mlAra—c作为凋亡诱导剂，AnnexinV／PI荧光标记和DNAladder分别检测Ara—c作用48小时后，同时加入150um01／L的cocl：，干扰组、对照组和未转染组细胞凋亡的区别。用sub—G1测定未加任何凋亡诱导剂，只加入150ll硼01／L的coCl：后，干扰组、对照组和未转染组细胞凋亡的区别。RT—PCR检测RNA干扰HIF-lⅡ后，McF一7中血管内皮生长因子(VEGF)表达的变化。流式细胞仪检测RNA干扰HIF—lQ后，McF一7细胞周期的变化。结果缺氧后，MCF-7细胞中的HIF

8、—la表达增加，而凋亡率较常氧降低。shRNA转染MCF-7细胞后，HIF—lⅡ的表达下调91．63％(p

9、因子一1Q；短发夹RNA：人乳腺癌细胞系：细胞凋亡；血管内皮生长因子：细胞周期中国协和医科大学硕士研究生论文EffectofSilencingHIF—l旺byRNAInterferenceonHumanBreastCarcinomaCellLineAbstractBackgroundH工F一1(hypoxia—induciblefactor一1)isanimportantoxygen—dependenttranscriptionalfactor．HIF一1contr01stheexpressionofavariet