cd147基因沉默对甲状腺乳头状癌k1细胞增殖侵袭能力影响

《cd147基因沉默对甲状腺乳头状癌k1细胞增殖侵袭能力影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、福建医科大学2011届硕士研究生毕业论文CD147基因沉默对甲状腺乳头状癌K1细胞增殖侵袭能力的影响摘要目的：通过比较几种特异的小干涉RNA(siRNA)对甲状腺乳头状癌K1细胞CD147基因表达的沉默效果，并筛选出有效的特异的小干涉RNA；并进一步研究CD147基因沉默后对甲状腺乳头状癌K1细胞增殖侵袭能力的影响，从而为甲状腺乳头状癌的基因治疗提供新的靶点。方法：人工设计合成3对不同的CD147-siRNA，分别转染人K1细胞为实验组(S1、S2、S3组)，同时设不加干预者为正常组，siRNA阴性对照进行

2、干预为阴性对照组。利用RNAi技术沉默甲状腺乳头状癌K1细胞CD147基因表达。通过RT-PCR和ELISA技术测定K1细胞转染后CD147mRNA及蛋白的表达来验证CD147-siRNA对CD147基因的沉默效果；同时通过RT-PCR及Western-Blot技术测定CD147基因沉默后MMP7及VEGF-C基因mRNA及蛋白的表达。并通过侵袭小室实验和MTT实验研究CD147基因沉默后对K1细胞的体外增殖及侵袭能力的影响。结果：各组细胞经过CD147-siRNA转染后发现：S1组CD147mRNA及其蛋

3、白表达量与正常组和阴性对照组相比未见明显变化(P>0.05)。而S2、S3组CD147mRNA及其蛋白表达量较正常组和阴性对照组明显减少(P<0.05)。其中与正常组相比，CD147mRNA的表达抑制率分别为67.81%和72.48%；CD147蛋白表达抑制率为31.65%和35.47%。S2、S3组K1细胞中MMP7mRNA表达抑制率分别为50.25%、53.40%，MMP7蛋白表达抑制率分别为41.58%、40.49%。S2、S3组K1细胞中VEGF-CmRNA表达抑制率分别为66.41%和56.57%

4、，VEGF-C蛋白表达抑制率分别为51.88%和41.57%。同时MTT实验提示CD147基因沉默后48h，S2、S3组K1细胞的生长抑制最明显，分别达到41.59%、40.86%，而转染后72h的抑制率分别为39.39%，38.88%。Transwell小室实验检测转染后72h的S2、S3组K1细胞，较正常组相比抑制率分别为35.87％、30.16%。而转染的S1、Normal组、Control组在细胞的增殖及侵袭力方面未见明差异(P>0.05)。结论：本研究构建的3对针对CD147基因的siRNA序列中

5、，S2及S3组CD147-siRNA序列可有效沉默CD147基因的表达，并在进一步的研究中发现CD147基因沉默后可降低下游MMP7和VEGF-C基因蛋白及mRNA的表达，并降低K1细胞的体外增殖侵袭能力。因此我们猜测基于CD147的RNAi技术可望成为甲状腺乳4福建医科大学2011届硕士研究生毕业论文头状癌基因治疗的新靶点。关键词：甲状腺肿瘤小干扰RNA细胞外基质金属蛋白酶诱导因子基质金属蛋白酶-7血管内皮生长因子-C淋巴转移5福建医科大学2011届硕士研究生毕业论文CD147GeneSilencingI

6、nfluencesTumorCellProliferationAndInvasionInThyroidPapillaryCarcinomaCellLineK1ABSTRACTObjective:InordertofilteredouttheeffectiveCD147-siRNAsequencewhichcaninhibiteffectivelytheexpressionofCD147inhumanthyroidpapillarycarcinomacelllineK1.Infollowing,wealsoi

7、nvestigatedtheeffectofproliferationandinvasionactivityinhumanthyroidpapillarycarcinomacelllineK1aftertheCD147genesilencing.Thusmayprovideanoveltargetingenetherapy.Methods:TodesignedandsynthesizedthreedifferentpairssequenceofCD147-siRNAwhichweretransfectedi

8、ntoK1cellstoknockdowntheexpressionofCD147namedexperimentalgroupS1,S2,S3,inadditionincludingnormalgroupandnegativecontrolgroup.mRNAandproteinlevelsofCD147weredetectedbyRT-PCRandELISA.AndalsodetectedthemRNAandp