顺铂对沉默βcatenin的卵巢细胞癌skov3细胞增殖、凋亡与侵袭的影响

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1、中文摘要顺铂对沉默13-catenin的卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡及侵袭的影响摘要目前，卵巢上皮性癌(epithelialovariancancer,EOC，以下简称卵巢癌)的病死率居于妇科恶性肿瘤之首。因卵巢的解剖位置隐匿，且早期症状多不典型，使多数患者确诊时已处于晚期，5年生存率不超过30％11I。目前治疗卵巢癌的最大难点是化疗耐药问题，这就需要更具有针对性的靶向治疗来提高治疗效果和五年生存率。目前研究证实【2】人类的多种癌症中普遍存在Wnt／13一catenin信号转导通路的异常激活，如乳腺癌、结直肠癌、

2、卵巢癌、喉癌等，该通路作为肿瘤基因靶向治疗的新靶点已经成为分子生物学、细胞生物学和新抗肿瘤药物研发领域的一大热点。越来越多的实验【3，41显示在卵巢癌中，Wnt／13．catenin信号转导通路起着重要作用，但是其机制还没有完全被认知【5】。13-catenin是Wnt／13一catenin信号转导通路的核心蛋白，其在细胞浆内的的聚积是Wnt／13．catenin信号转导通路激活的标志。Rask等【3】用复合免疫沉淀法发现在低分化的III期浆液性卵巢癌中存在13．catenin的胞浆高表达，而正常卵巢组织中未发现，

3、表明Wnt／13一catenin信号转导通路在卵巢癌中被异常激活。因此降调或沉默Wnt／13．catenin信号转导通路中的核心蛋白13-catenin是否可以阻断该通路，从而引起肿瘤细胞生物学特性的变化?Verma等【6】通过siRNA沉默13-catenin蛋白后，发现在体外可以抑制结肠癌细胞的增殖，而且还能够降低结肠癌细胞在裸鼠体内的成瘤能力，延长荷瘤裸鼠的生存期，提示13-catenin参与了肿瘤细胞的增殖、凋亡等过程，可以作为肿瘤治疗的靶点。近来，有证据显示f7J13．catenin与肿瘤化疗的耐药产生有

4、一定的相关性，它可以通过激活Wnt／13．catenin信号转导通路的下游靶基因(如MDRl、c—myc、MRP2、cyclinDl等)，从而影响肿瘤细胞对药物的敏感性。本实验利用包含有13一catenin特异序列RNA的慢病毒沉默13．catenin蛋白后观察顺铂对卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡及侵袭力的影响。目的：通过沉默Wnt／15一catenin信号转导通路中的关键蛋白p．catenin，观察顺铂对卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡以及侵袭力的影响，从而为卵中文摘要巢癌的耐药逆转提供新思路。方法：1分别用p．c

5、atenin．RNAi．LV(13-catenin．RNAi慢病毒液)、13-catenin—negative．LV(空载体慢病毒液)转染卵巢癌SKOV3细胞，采用westernblot方法检测转染前后卵巢癌SKOV3细胞中D．catenin蛋白的表达水平；2实验分为六组，分别为：SKOV3、SKOV3．cDDP(单用顺铂处理的SKOV3)、SKOV3．neg(转染空载体慢病毒的SKOV3)、SKOV3．neg—cDDP(转染空载体慢病毒并用顺铂处理的SKOV3)、SKOV3一RNAi(转染13-catenin—R

6、NAi慢病毒的SKOV3)及SKOV3．RNAi—cDDP(转染13-catenin．RNAi慢病毒并用顺铂处理的SKOV3)。3MTT法检测不同浓度顺铂对SKOV3的增殖抑制率的变化、转染p．catenin—RNAi．LV后不同浓度顺铂对SKOV3的增殖抑制率的变化、转染13．catenin．negative．LV后不同浓度Jimtfl对SKOV3的增殖抑制率的变化；4采用流式细胞术检测各组细胞的凋亡率情况；5利用Transwell小室分别进行体外各组细胞迁移力及侵袭力的测定；6统计学方法：数据统计采用SPSS1

7、3．0统计软件处理，计量资料以均数4-标准差表示，方差齐性检验，多组间的比较采用方差分析，以a=0．05为检验水准，当P<0．05时，差异有统计学意义；当P>0．05时，差异无统计学意义。结果：lWesternblotting结果显示：13-catenin在SKOV3高表达，转染13-catenin—RNAi．LV后p．catenin在SKOV3中的表达量下降，统计Westernblotting结果发现13．catenin蛋白的表达量下降大于70％，证实B．catenin被13-catenin-RNAi．LV有效沉

8、默。2MTT结果：通过半数抑制浓度(IC50)计算软件得出顺铂对SKOV3、SKOV3一RNAi的IC50值，每组重复三次，得出顺铂对SKOV3的IC50是(13．7±5．24)“∥ml，对SKOV3．RNAi的IC50是(6．94+2．69)H∥ml，两组之间的差异具有统计学意义(P=O．000)。SKOV3．RNAi与SKOV3．neg及SKOV3相比，