光动力疗法对人卵巢癌细胞系skov3凋亡的影响论文

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1、光动力疗法对人卵巢癌细胞系Skov3凋亡的影响论文【摘要】目的通过对经光动力疗法(PDT)处理后卵巢癌细胞系Skov3发生凋亡情况的研究，探讨光动力学疗法对体外培养的人卵巢癌细胞的影响。方法采用不同能量激光对不同浓度光敏剂(5-ALA)处理过的卵巢癌细胞系(Skov3)进行照射,48h后应用光镜、电镜进行形态学观察,同时利用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果倒置显微镜下经光动力学处理后Skov3细胞体积缩小，细胞变形、皱缩，细胞核浓缩、深染，染色质密集成斑块状，细胞间失去彼此连接，透射电镜下可见致密的染色质沿核膜下聚集，有凋亡小体形成。流式细胞仪定量分析最大细胞凋亡率为60.5%

2、。结论PDT通过诱导凋亡对体外培养的Skov3细胞产生杀伤作用。【关键词】光动力学;细胞凋亡;卵巢癌【Abstract】ObjectiveTheapoptosisofovariancancercelllineSkov3underthephotodynamictherapyictherapyingynecologicalcancer.MethodsOvariancancercelllineSkov3treatedorphologicalcharacteristicsicroscopyandelectronicmicroscopy,andcellapoptosisetry(FCM)

3、.ResultsThecytomorphosisandshrinkage,nucleuscondensationandanachromasia,anddensechromatinliningalongthecellmembraneicroscopeincelllinereceivedphotodynamictherapy.Throughtransmissionelectronmicroseope(TEM),atingatheringalongmembraneofcellnuclearandapoptoticbodyformed.Themaximuminhibitionratei

4、nedbyFCM.ConclusionPhotodynamictherapyinhibitsthegroictherapy;Apoptosis;Ovariancancer光动力学疗法(photodynamictherapy,PDT)是除手术、化疗和放疗等传统肿瘤治疗手段外的一种新的肿瘤治疗方法。它是利用光敏剂在人体内选择性聚集的特性.freelsa′s)染料购自北京赛百胜生物公司。3.主要仪器:LH-多功能激光治疗仪(天津市雷意光电技术公司生产)由北京协和医院激光室提供;倒置显微镜(日本Olympus公司)由北京协和医院妇科肿瘤实验室提供;JEOL1010型透射电镜(日本电子公

5、司)由北京协和医院电镜中心提供;EPICS-profileⅡ流式细胞仪(美国coulter公司)由北京协和医院流氏细胞仪室提供。二、方法1.细胞培养：取卵巢癌细胞系Skov3，贴壁生长在含有10%胎牛血清的RPMI-1640培养基中培养。将细胞按1×105/孔接种于96孔板中，细胞培养在5%CO2浓度、饱和湿度及37℃条件下进行，细胞融合80%时以0.25%胰酶消化传代。含10%热灭活小牛血清的RPMI1640培养液。2.光动力学疗法。光敏剂5-ALA分别按0.1、0.5、1.0、2.5mmol/L的浓度配制，按每孔100μl加入已培养24h的细胞中，每一种光敏剂浓度与光照强度

6、设3个复孔，对照组分别为仅照光而不加光敏剂组和既不加光敏剂也不照光组。细胞加入光敏剂后避光培养4h。弃去含光敏剂的培养液，每孔加入1640培养液200μl后在避光条件下以波长630nm的氦-氖激光照射各孔细胞，照射光能量密度分别设定为0.1、0.5、2.5、12.5J/cm2，功率为53mTT比色法分析实验结果，确定光敏剂浓度及光照强度。按上述浓度和强度处理细胞后，胰酶充分消化并收集细胞，以4℃，1000r/min离心10min，弃上清液，磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤细胞2次，重新悬浮细胞于200μl结合缓冲液(bindingbuffer)中。加入10μlAnnexinⅤ-FIT

7、C及5μlPI(碘化丙啶)染液，混匀后避光室温反应15min后加入300μl结合缓冲液(bindingbuffer)，1h内用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果判断,AnnexinⅤ+/PI-为凋亡细胞;AnnexinⅤ+/PI+为坏死细胞;AnnexinⅤ-/PI-为存活细胞。结果一、细胞的形态学变化贴壁生长的Skov3细胞经光动力治疗后，相邻细胞间失去彼此连接，轮廓更加清晰可见，细胞收缩变圆，附壁能力减弱，容易从培养板上脱落下来。凋亡后期细胞体积缩小、变形、皱缩，染色质浓缩边集，形成由膜状