5氨基乙酰丙酸光动力疗法对人卵巢癌细胞的杀伤作用

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1、5氨基乙酰丙酸光动力疗法对人卵巢癌细胞的杀伤作用【摘要】目的探讨5氨基乙酰丙酸(5aminolevulinicacid,5ALA)介导的光动力疗法(photodynamictherapy,PDT)对体外培养的人卵巢癌3AO细胞的杀伤效应。方法显微镜观察细胞形态;MTT法检测5ALA介导的PDT(5ALAPDT)对3AO细胞增殖的抑制作用;PI染色及AnnexinVPI双染结合流式细胞术分析5ALAPDT对3AO细胞的细胞周期及死亡方式的影响。结果5ALAPDT后3AO细胞出现典型的凋亡形态学改变;细胞抑制率随着5ALA浓度及激

2、光能量密度的升高而升高(P<0.01)，当光敏剂浓度达到一定水平时，抑制率不再相应升高，该作用存在浓度饱和现象;流式细胞术显示PDT后细胞发生了G0/G1期生长停顿(P<0.05)，有明显的晚期凋亡和继发性坏死(P<0.01)。结论5ALA对卵巢癌3AO细胞有杀伤作用;凋亡是5ALAPDT杀伤卵巢癌细胞的一种机制。【关键词】5氨基乙酰丙酸;光动力疗法;卵巢癌;凋亡)ABSTRACT:ObjectiveTostudytheeffectsof5aminolevulinicacid(5ALA)mediatedphotodynam

3、ictherapy(PDT)onhumanovariancarcinoma3AOcellsinvitro.MethodsMorphologicalchangesinedbymicroscopy;theinhibitoryeffectsof5aminolevulinicacidmediatedphotodynamic(5ALAPDT)on3AOcellsinedbyMTTassay;cellcycleof3AOcellsetryodalityof3AOcelldeathinducedby5ALAPDTinedbyfloetryorphologi

4、calchangesofapoptosisoccurredafter5ALAPDT.Theinhibitionrateofcellsincreasedgraduallya3AOcellssignificantlyincreasedafterphotodynamictherapy,andtheya3AOcells;apoptosismightbeoneofthemechanismsof5ALAPDTonovariancarcinoma.　　KEY1640购自Hyclone公司;新生牛血清购自杭州四季青公司;碘化丙啶(PI)、四甲基偶氮唑蓝(MT

5、T)购自Sigma公司;胰酶、Rnase、二甲基亚砜(DMSO)、丫啶橙(AO)购自Gibco公司;AnnexinVPI双染试剂盒购自Biovison公司。　　1.2方法　　1.2.1细胞培养人卵巢癌细胞株3AO培养于含100mL/L新生牛血清的RPMI1640培养液中，细胞均呈单层贴壁生长，在50mL/LCO2、饱和湿度、37℃孵箱内常规培养。2.5g/L的胰酶消化，每3d传代一次，取对数生长期细胞进行实验。　　1.2.2照射方式光动力治疗机的红光(波长630nm，功率300mI1640培养液重悬，计数，以每孔1.0×104个细胞接种于96孔细

6、胞培养板上，在50mL/LCO2、饱和湿度、37℃孵箱内常规培养36h，弃培养液。单纯光敏剂组与5ALAPDT组每孔加入不同浓度(0.1、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0mmol/L)5ALA0.15mL;单纯激光组与正常对照组加入无血清RPMI1640培养液。每组均设4个复孔，孵箱内避光培养4h。单纯激光组与5ALAPDT组以不同能量密度的激光(1.25、2.5、5.0、10.0J/cm2)进行照射，照射后所有细胞换成含血清的RPMI1640培养液，孵箱内继续避光培养24h，进行MTT比色分析。以490nm为测量波长测其A值。根

7、据下述公式计算各组细胞的抑制率：抑制率=(对照组A值-实验组A值)/(对照组A值-空白组A值)×100%。实验重复3次。　　1.2.65ALAPDT后细胞周期变化的检测使用流式细胞仪结合PI单染检测5ALAPDT对3AO细胞周期的影响。取对数生长期细胞常规消化种于6孔板中，贴壁后36h换成无血清RPMI1640过夜使细胞同步化，5ALA浓度为1.0mmol/L，以激光能量密度为2.5J/cm2的激光照射后继续培养6、12、24h，分别收集5000个细胞，PI单染，上机检测。实验重复3次。　　1.2.75ALAPDT后细胞死亡方式的检测使

8、用AnnexinVPI双染试剂盒结合流式细胞仪，检测5ALAPDT后细胞的死亡方式。取对