补骨脂素对乳腺癌mcf7和mdamb231细胞体外作用的比较研究论文

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1、补骨脂素对乳腺癌MCF7和MDAMB231细胞体外作用的比较研究论文谭敏，孙静，赵虹，何青莲，胡少为，李楚天【摘要】【目的】观察并比较补骨脂素对人乳腺癌MCF7和MDAMB231细胞的抑制作用。【方法】以不同浓度的补骨脂素(25000、12500、6250、3125μg/mL)对人乳腺癌细胞株MCF7雌激素受体(ER)阳性和MDAMB231(ER阴性)进行体外抑制实验，运用流式细胞仪观察细胞的周期变化,AnnexinV和碘化丙锭(PI)双染法观察细胞凋亡情况,基因芯片检测补骨脂素对两种人乳腺癌细胞基因表达谱的影响。【结果】补骨脂素对人乳腺癌细胞株M

2、CF7有显著抑制作用(P005)，半数抑制浓度(IC50)为15160μg/mL;作用24h后.freelanCuiter公司产品;噻唑蓝(MTT)试剂为Sigma公司产品;晶芯22K人类全基因组寡核苷酸微阵列芯片V10，共有21522条70mer(monomerieunit，单体单元)长度的OligoDNA，为博奥生物公司产品;LuxScan30图像分析软件为CapitalBio公司产品;其他基因芯片检测仪器及分析系统均为博奥生物公司产品。12MTT法测定补骨脂素对两种乳腺癌细胞株生长的影响分别取MDAMB231及MCF7两种细胞株对数生长期细胞05

3、×105分别接种于96孔培养板，100μL/孔，培养过夜后，分别加入25000、12500、6250、3125μg/mL补骨脂素，培养24h，加MTT后在酶标仪上以570nm波长检测D值，每组检测8孔。按公式计算抑制率：p抑制=(1-D实验组/D对照组)×100%。以半数抑制浓度(IC50)计算软件计算IC50。13流式细胞仪检测细胞周期改变将培养的两种细胞株按上述4个浓度加入补骨脂素，设空白对照组，培养24h后收集细胞，用磷酸盐缓冲液(PBS)洗细胞1～2次，1500r/min离心,弃上清，加体积分数75%乙醇1mL固定，-20℃过夜后，PBS洗细胞1~2次，加

4、500μgPI染液，4℃孵育30min，上流式细胞仪检测。14流式细胞仪检测细胞早期凋亡分别收集4个浓度及空白对照组细胞，用PBS洗细胞1~2次，1500r/min离心，弃上清，将细胞悬于BindingBuffer中，加5μLAnnexinV和10μLPI，室温避光孵育5min，上流式细胞仪检测。15基因表达谱芯片检测差异表达基因Trizol一步法分别提取两种细胞株给药组(补骨脂素浓度为125μg/mL)及空白对照组细胞中的总RNA，按说明书方法进行。两种细胞株分别以Cy5脱氧胞苷三磷酸(Cy5dCTP)标记补骨脂素作用组，Cy3dCTP标记空白对照组为第1对样

5、本;荧光交换，以Cy3dCTP标记补骨脂素作用组，Cy5dCTP标记空白对照组为第2对样本。两对样本分别在两张22K晶芯人类全基因组寡核苷酸微阵列芯片上，42℃杂交过夜。杂交后清洗甩干用于扫描。芯片使用LuxScan10KA双通道激光扫描仪进行扫描，获取每个阵列、每种染料(Cy3和Cy5)的扫描图像。使用基因芯片数据提取软件从扫描图像中提取数据。进一步分析得出Cy3、Cy5的荧光数字信号值及Cy3∶Cy5比值(ICy3∶ICy5)，并分别计算出荧光交换2次重复试验的平均值，选出差异表达的基因并分析。16统计学方法采用SPSS150统计软件，各试验组比较采用方差分析

6、、多重比较。2结果21各组对两种乳腺癌细胞株生长的影响各个浓度补骨脂素对人乳腺癌MCF7细胞均有抑制作用，与空白对照组比较差异有显著性意义(P005)，IC50为15160μg/mL。25000μg/mL浓度组抑制率高达905%，而各个浓度的补骨脂素对人乳腺癌MDAMB231细胞均无明显抑制作用。结果见表1。22不同浓度补骨脂素对两种乳腺癌细胞增殖周期的影响表2结果显示，各浓度补骨脂素作用于MCF7细胞24h后，与空白对照组比较S期细胞比例减少，G1比例增加，2个高浓度组G2比例亦表1各组对两种乳腺癌细胞株生长的影响表2不同浓度补骨脂素对两种乳腺癌细胞增

7、殖周期的影响23不同浓度补骨脂素对两种乳腺癌细胞株早期凋亡的影响表3结果显示，较低3个浓度补骨脂素均可使MCF7细胞早期凋亡增加，经25000μg/mL浓度补骨脂素作用后细胞早期凋亡减少，可能该浓度的补骨脂素产生毒性作用，直接造成细胞坏死。各浓度补骨脂素均可使MDAMB231细胞早期凋亡增加,但增加的幅度较小。24基因表达谱芯片改变取两次实验的平均值中ICy3∶ICy5比值大于2或小于05的为差异表达基因。补骨脂素作用MCF7细胞24h后，出现了1053个差异表达基因，其中表达上调的有456个，表达