罗格列酮对人结肠癌细胞sw480体外作用及其机制实验的研究

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1、中文摘要罗格列酮对人结肠癌细胞SW480的体外作用及其机制的实验研究摘要目的：通过研究罗格列酮(Rosiglitazone，ROZ)对结肠癌细胞SW480的体外作用，观察罗格列酮联合抗癌药物氟尿嘧啶(5-FU)对SW480细胞体外作用的影响，进一步探讨ROZ抑制肿瘤细胞增殖及凋亡的可能机制，为寻求结肠癌治疗的新的药物提供理论依据。方法：1体外培养人结肠癌细胞SW480，采用四甲基偶氮唑蓝比色法(tetrzolium．basedcolorimetricassay,MTT)测定ROZ对该细胞增殖的抑制作用，选择合适的实验剂量；采用流式细胞仪测定细胞周期和凋亡率；普通光学显微镜及

2、透射电镜观察细胞形态学改变；采用流式细胞术(flowcytometry，FCM)半定量检测ROZ诱导人结肠癌细胞凋亡过程中相关蛋白PTEN、VEGF的表达情况。应用免疫组化法检测各组细胞中PPARY、PTEN、VEGF蛋白的表达情况。2采用MTT比色法检测罗格列酮与抗癌药物氟尿嘧啶联合应用对人结肠癌细胞SW480的增殖抑制作用：采用金氏公式【1】分析相互指数(IntrtactionIndex)，评价联合后的作用，如q>0．85表示相加作用，q<0．85为拮抗作用。结果：1．1MTT检测结果显示，罗格列酮(12．5、25、50、100}tmol／L)ROZ对SW480细胞增殖

3、具有抑制作用。不同浓度ROZ处理细胞24～72h后，与对照组相比，各实验组OD值均有不同程度下降，差异有显著性(P<0．01)。各实验组中文摘要间比较，差异亦具有显著性(P<0．01)，随着ROZ处理浓度的增加、作用时间的延长，OD值逐渐下降。ROZ对SW480细胞的增殖抑制作用呈明显的剂量一效应关系和时间一效应关系。抑制率以1009mol／LROZ作用72h为最高，可达66．7％。1．2流式细胞仪检测结果显示：0、12．5、25、50pmol／L作用SW480细胞48h后，随药物浓度增加，G0／Gl期细胞逐渐增多，S期细胞逐渐减少。提示ROZ可阻滞SW480细胞周期于GO

4、／G1期，该作用有剂量依赖性。O、12．5、25、50灶mol／LROZ作用细胞48h后，凋亡百分率分别为：3．76％、7．55％、20．54％、31．85％。流式细胞仪可测得典型的亚二倍体凋亡峰，凋亡率随ROZ浓度增加而逐渐升高。各处理组的凋亡率与对照组相比，有显著性差异(P<0．01)。1．3光镜下观察细胞形态变化，结果显示：未经药物作用的细胞形态多样，有圆形、梭形及多边形，形态饱满，药物作用后细胞皱缩、破裂，有的细胞两端出现细长的伪足，细胞胞浆中出现空泡，脱落细胞增多。1．4透射电镜下观察细胞超微结构发生改变：细胞体积缩小，微绒毛数量减少，核膜皱缩，核染色质高度浓缩，

5、电子密度增高，边集于核膜下，形成沿核膜收缩的新月状小体，有的出现核固缩。1．5流式细胞仪半定量检测SW480细胞中PTEN、VEGF蛋白表达，结果显示：O、12．5、25、509mol／LROZ作用SW480细胞48h后，各组VEGF蛋白的荧光指数FI值均随处理组药物浓度增大而逐渐降低。PTEN蛋白的荧光指数FI值随处理组药物浓度增大而逐渐增大。对于每一种蛋白，比较其处中文摘要理组和空白对照组的FI值，均有显著性差异(P<0．05或P<0．01)。1．6免疫组化检测结果显示：PPARY、PTEN蛋白表达于细胞胞浆，VEGF蛋白表达于细胞胞浆和血管内皮细胞，可见棕黄色着色。按

6、照IHS值法进行免疫组化评分。VEGF各组蛋白表达值(IHS值)随ROZ剂量的增大而逐渐减小，PPARY、PTEN各组蛋白表达值(IHS值)则随药物剂量的增大而逐渐增加。对于每种蛋白，比较其处理组和阴性对照组的IHS值，均有显著性差异(P

7、式分析相互作用指数显示，不同浓度5-FU联合12．5、25、50pmol／LROZ的q值均大于O．85。结论：1ROZ在一定剂量范围内能抑制结肠癌细胞增殖，并呈时间和剂量依赖性。2ROZ抑制结肠癌细胞生长与诱导细胞凋亡、阻滞细胞周期于GO／G1期有关，该作用呈一定的剂量依赖性。3ROZ抗结肠癌作用机制可能与其下调VEGF蛋白，上调PPARY、PTEN蛋白的表达有关。4ROZ具有抑制结肠癌细胞增殖及诱导其凋亡的作用，为结肠癌治疗提供了新的思路和实验依据。5ROZ可与5．FU协同抑制SW480细胞的增殖作用。中文摘要4