积雪草酸与化疗药物联用抗肿瘤效应的初步研究

《积雪草酸与化疗药物联用抗肿瘤效应的初步研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、积雪草酸与化疗药物联用抗肿瘤效应的初步研究：林娜，高静，方春钱，张海峰，杨永建，顾亚君，郭文洁【摘要】　　目的：研究积雪草酸（asiaticacid，AA）与化疗药物环磷酰胺（CTX），5氟尿嘧啶（5Fu）联用的抗肿瘤作用。方法：采用在体与离体实验相结合的方法，观察AA与5Fu或CTX联用对肝癌细胞株HepG2增殖和Heps肝癌腹水瘤、实体瘤生长的影响。用MTT法检测联用AA和5Fu的抗肿瘤效果。结果：10，15，20，25μmol/LAA与50，7.5，1μmol/L5Fu联用，具有显著的抗肿

2、瘤作用，AA不降低5Fu对HepG2细胞增殖的抑制作用。AA和CTX联用于Heps腹水瘤小鼠，发现AA（50,100mg/kg）和CTX（20mg/kg）联用与单用CTX一样，能抑制腹腔积液的增生，且可延长Heps腹水瘤小鼠的寿命；AA和CTX联用于Heps实体瘤小鼠，有明显的抑瘤作用，而且AA能对抗CTX诱导的谷胱甘肽（GSH）水平的降低，可能对肝脏的抗氧化能力有一定的保护作用。结论：AA与化疗药物联用，可以减弱化疗药物的毒副作用。【关键词】积雪草酸；5氟尿嘧啶；环磷酰胺；联合用药；抗肿瘤　　［Ab

3、stract］Objective:Studytheantitumoreffectsofasiaticacid（AA）binedotherapeuticscyclophosphamide(CTX)or5fluorouracil(5Fu).Methods：ThecytotoxiceffectsofthebinationofAAand5FUontumorcelllinesHepG2orandascitescarcinomaoreffectofAA(50,100mg/kg)andCTX(20mg/kg).

4、Results：TT（Sigma公司）；5Fu（上海旭东海普药业有限公司）；积雪草酸，纯度95%（广西昌洲天然产物有限公司），用于在体实验的AA用β环糊精包埋，由江苏大学化学化工学院张蓉仙老师制备；环磷酰胺（江苏恒瑞医药股份有限公司，批号：国药准字H32020857）；β环糊精（南京中脉远红股份有限公司谢家坤高工惠赠）；谷胱甘肽（GSH）测定试剂盒（南京建成生物工程研究所）。　　1.2离体实验　　1.2.1细胞培养　　HepG2细胞培养于含10%小牛血清的MEM培养基。细胞接种于培养瓶中，置于37℃

5、，5%CO2的孵箱中培养，2～3d传代1次。　　1.2.2实验分组　　将处于对数生长期的细胞接种于96孔培养板，接种密度为2×104个/ml，每孔100μl。培养24h后，加入10，20，30，40μmol/LAA，48h后用检测细胞活性，分析AA对HepG2细胞增殖的影响。采用50，7.5，1μmol/L的5Fu分别与不同浓度AA（10，15，20，25μmol/L）联合用药。以含1‰DMSO的培养基为对照。　　1.2.3MTT法检测细胞存活率　　96孔培养板中细胞经药物处理后，弃去培养基，每孔加10

6、0μlMTT（Dhank′s液溶解，1mg/ml），37℃孵育4h后，吸去上清，每孔加DMSO100μl，待结晶物充分溶解，用酶标仪（Spectrum190，MoleculerDevices）于570nm处测光密度值。　　1.3在体实验　　1.3.1荷瘤小鼠模型　　Heps腹水瘤模型:取Heps腹水瘤小鼠，处死后浸泡于75%乙醇5min，腹腔穿刺取腹腔积液，计数稀释至1×107个/ml，取0.2ml肿瘤细胞悬液接种于ICR小鼠腹腔。Heps实体瘤模型：同Heps腹水瘤模型，制备2×107个/ml的Hep

7、s瘤细胞悬液，0.2ml/只，接种于ICR小鼠右侧腋下。腹水瘤小鼠存活率检测分3组：对照组,20mg/kgCTX组，50mg/kgAA和20mg/kgCTX联用组。　　1.3.3腹水瘤小鼠存活率分析　　观察小鼠的存活情况，并记录每天存活小鼠只数，进行生存期比较。存活率=存活小鼠/小鼠总数×100%　　1.3.4实体瘤小鼠抑瘤率检测　　给药15d后，小鼠眼底静脉丛取血，然后颈椎脱臼处死小鼠，剥取肿瘤组织，称重，计算肿瘤抑制率。　　1.3.5肝脏GSH含量检测　　取肝脏左大叶相同部位肝组织，用适量生理盐水制备

8、成10%组织匀浆，试剂盒检测GSH含量。　　1.4统计方法　　实验数据运用SAS软件进行单因素方差分析（ANOVA），组间比较作SNKq检验。显著性标准为α＝0.05。腹水瘤小鼠存活率比较用χ2检验。　　2结果　　2.1AA对肿瘤细胞增殖的影响如图1所示，AA的剂量小于20μmol/L时，对HepG2细胞的生长没有明显影响；当剂量达到30μmol/L时，细胞活性显著降低；随着剂量的继续加大，抑制细胞增殖的作用逐渐加强。　　2