桦褐孔菌对糖尿病豚鼠脂类代谢机理的影响

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1、桦褐孔菌对糖尿病豚鼠脂类代谢机理的影响李天洙，朴永泉，张学武【摘要】目的通过观察桦褐孔菌水提取物对糖尿病豚鼠的甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)，低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)等生化指标及对Ser/Thr激酶蛋白激酶B(PKB)、HMGCoA还原酶(HMGCoAreductase)表达的影响，初步探讨桦褐孔菌影响糖尿病豚鼠脂类代谢的机理。方法选用成年雄性豚鼠48只分组，每组8只：正常组，桦褐孔菌小剂量组、中剂量组、大剂量组，阴性对照组及阳性对照组。链脲佐菌素(ST

2、Z)腹腔注射制作豚鼠糖尿病模型，灌胃桦褐孔菌水提取物，治疗8周后，心脏取血测定TC、TG、LDL-C和LDL-C，取肝脏和骨骼肌，用GCoA还原酶、PKB的表达。结果桦褐孔菌治疗TC、TG和LDL-C水平明显下降，HDL水平略有增高，HMGCoA还原酶的表达降低，PKB的表达增高明显，并且表现为剂量梯度依赖。结论桦褐孔菌对糖尿病豚鼠TC、TG、LDL水平的降低具有明显的效果,这种结果可能和桦褐孔菌增强PKB表达和的降低HMGCoA还原酶的表达，进而减少脂肪的分解和胆固醇的合成，一定程度上纠正脂类代谢

3、紊乱相关。【关键词】桦褐孔菌;糖尿病豚鼠;脂类代谢　桦褐孔菌(Inonotusobliquus,Chaga)，主要分布于北纬45～50°的地区，在我国主要分布在黑龙江和吉林省长白山地区，民间广泛利用防治癌症等多种疑难杂症[1]。桦褐孔菌提取物具有很多生物活性，如增强免疫力、抗肿瘤、抗病毒(主要是HIV)、抗氧化、抑制血小板聚集、抗炎、抗损伤、降血糖和血脂等作用。目前，国外对桦褐孔菌提取物治疗糖尿病已引起重视，但国内有关此项研究的报道较少。本实验通过测定糖尿病豚鼠TC、TG、LDL-C、HDL-C等生

4、化指标及对PKB、HMGCoA还原酶表达，初步探讨桦褐孔菌对糖尿病豚鼠纠正脂类代谢紊乱的生物化学及分子生物学机制，为桦褐孔菌的临床应用提供理论依据。　　1材料与仪器　　1.1动物Hartley雄性豚鼠80只，体质量500～600g,由延边大学医学部实验动物科提供。　　1.2用药桦褐孔菌水提取物，由延边圣林菌业有限公司提供。　　1.3试剂STZ(美国Sigma公司)，蛋白质提取纯化试剂盒(Biossp1250)，HMGCoA还原酶、PKB单克隆抗体(SantaCruz,USA);其他试剂均应用国产优级

5、纯试剂。　　1.4仪器全自动生化分析仪(日立7600)，电泳装置(Bio-rad)。　　2方法　　2.1制作糖尿病动物模型实验动物适应性喂养1周后,禁食不禁水12h,一次性腹腔注射STZ80mg/kg(临用前用pH4.5的柠檬酸缓冲液溶解,配成浓度为1%混合液,30min内注射完),第7天禁食不禁水12h,用乙醚麻醉后取眦静脉血,离心后取血清测FBG,取FBG≥8.83mmol/L者作为糖尿病成模标准[2]。　　2.2实验分组及药物处理取造模成功的糖尿病豚鼠48只(本实验造模成功54只)，按血糖和体

6、质量随机分为阴性对照组(模型组)，桦褐孔菌小剂量组、中剂量组、大剂量组及阳性对照组(盐酸二甲双胍治疗组)，每组各8只，另选未造模的8只豚鼠为正常对照组，桦褐孔菌小剂量组、中剂量组、大剂量组分别灌胃桦褐孔菌提取物300，600，900mg/kg。阳性对照组灌胃盐酸二甲双胍200mg/kg，正常对照组和糖尿病模型组每天灌胃相同剂量的蒸馏水1次,连续8周。实验期间饲以标准饲料、自由饮水及新鲜蔬菜。　　2.3实验观察及生化指标测量实验8周后，各组禁食不禁水12h，麻醉后心脏取血测量生化指标(TC、TG、LD

7、L-C、HDL-C)。　　2.4测定实验6周后，取豚鼠肝脏和大腿骨骼肌，利用蛋白质提取纯化试剂盒提取总蛋白质。提取的蛋白质进行10%SDS-PAGE电泳，每孔点样30μl蛋白提取液(含30μg总蛋白)，然后将电泳分离的蛋白质转移到PVDF膜上(4℃恒压100V，1.5h)。用牛奶封闭室温1h后，用TBST清洗3次,5min/次。加入1∶1000稀释的羊抗豚鼠HMGCoA还原酶、PKB单克隆抗体室温培育1h，再加入1∶200稀释的兔抗羊IgG二抗培育2h。取出膜后，TBST充分冲洗3次,15min/次

8、。压片后加入ECL显色液，置于UVP图像成像仪中观察并分析结果。条件设置为曝光1，2，4min，CCD自动获取图像。以β-actin作为内参对照。　　2.5统计分析数据以±s，实验前后数据比较采用t检验，各组间进行单因素方差分析。实验数据处理均用SPSS16.0统计软件进行统计分析。　　3结果　　3.1实验组TG、TC的变化实验前后相比较，阳性对照组和桦褐孔菌提取物大剂量组的TG水平均显著减少(P0.01)，桦褐孔菌提取物中剂量组的TG水平均明显减少(P0.05)，阳