重组变构人trail联合柔红霉素对白血病细胞诱导凋亡作用及其机制的研究

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1、重组变构人TRAIL联合柔红霉素对白血病细胞诱导凋亡作用及其机制的研究作者：张学军　温丽　王福旭　罗建民　潘崚　刘小军　杜行严　董作仁　杨世芳【摘要】　　为了研究重组变构人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（rebinanatmutanthumanTRAIL,rmhTRAIL）单用及与柔红霉素（DNR）联合应用对白血病细胞株U937、K562的诱导凋亡作用及其机制，以正常人胚肺成纤维细胞株MRC-5作对照，采用MTT法检测体外培养的U937、K562白血病细胞株在rmhTRAIL单用和联合DNR作用下增殖的抑制效应；用

2、半定量逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）法检测DNR处理前后白血病细胞TRAIL死亡受体和诱杀受体的mRNA表达水平。结果表明：rmhTRAIL对白血病细胞株U937、K562有较明显的抑制增殖作用，DNR与TRAIL联合对抑制肿瘤细胞具有协同性，与各药单独使用比较均有显著差异（P<0.05）；经DNR作用后，U937、K562细胞的死亡受体DR4、DR5水平上调，而两种诱杀受体DcR1、DcR2表达未受影响。结论：在体外rmhTRAIL单用或与DNR联用均能明显抑制白血病细胞增殖，rmhTRAIL与DNR

3、对白血病细胞的杀伤有协同作用，其诱导机制可能与U937、K562细胞死亡受体DR4、DR5表达水平上调有关。【关键词】rmhTRAIL；U937细胞；K562细胞；柔红霉素　　binedEffectofRebinantMutantHumanTRAILandDaunorubicininInducingApoptosisofLeukemiaCellandItsMechanism　　AbstractTheaimofstudytmuctanthumanTRAIL(rmhTRAIL)iacelllinesanditsmec

4、hanism.Thefibroblasts(MRC-5)ofnormal-humanembryoniclunghTRAILandDNRoronlyTRAIL,thecytotoxiceffectandtheapoptosisrateinK562,U937cellseasuredbyMTTassay.TheexpressionlevelsofTRAILdeathreceptorandTRAILdecoyreceptormRNAinthesethreecelllinesiquantitiveRT-PCRbeforan

5、daftertreatmenthTRIAL.DNRhadsynergisticinhibitoryeffecthTRAILonthegroRNAentofrmhTRAILandDNRthanthatinthosealone,RNAhTRAILaloneorinbinationiacelllinesandinducecellapoptosis,DNRandrmhTRAILhaveasynergisticinhibitoryeffectongroechanismmaycorrelatehTRAIL；U937cell；

6、K562cell；daunorubicin　　肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TNF-relatedapoptosis-inducingligand，TRAIL）是新近发现的肿瘤坏死因子超家族成员,可特异性地诱导肿瘤细胞凋亡而对正常细胞无明显杀伤作用。野生型TRAIL在稳定性、溶解性及生物活性等方面存在不足，重组变构人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（rebinantmutanthumanTRAIL，rmhTRAIL）是由北京沙东公司对野生型TRAIL结构进行环化变构后的优化产品，弥补了上述不足。我们以正常人胚肺成纤维

7、细胞株MRC-5作对照，检测rmhTRAIL单用及联合柔红霉素（daunorubicin,DNR）对人急性单核细胞白血病细胞株U937、人慢粒红白血病变细胞株K562的促凋亡作用，并在mRNA水平分析化疗药作用前后其两种TRAIL死亡受体DR4、DR5（deathreceptor4、5）和两种TRAIL诱杀受体DcR1、DcR2（decoyreceptor1、2）表达的变化，探讨rmhTRAIL治疗急性白血病的可能性及其机理，为rmhTRAIL作为新的抗肿瘤生物制剂治疗血液系统肿瘤提供理论依据。　　材料和方法　　

8、主要试剂　　RPMI1640培养粉、MEM培养粉、TRIzoL试剂、胰蛋白酶、四甲基偶氮唑蓝（MTT）和二甲亚砜（DMSO）均购自Gibco公司。新生牛血清为杭州四季清生物公司产品。rmhTRAIL冻干粉由北京沙东生物技术有限公司提供。柔红霉素为意大利S.P.A公司产品。引物由北京赛百盛公司合成。随机引物、M-MLV逆转录酶、TaqDNA聚合酶均购自美国Promega公司