冬凌草甲素联合柔红霉素对jurkat细胞的增殖抑制作用及其机制的研究

《冬凌草甲素联合柔红霉素对jurkat细胞的增殖抑制作用及其机制的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、泰山医学院硕士学位论文冬凌草甲素联合柔红霉素对jurkat细胞的增殖抑制作用及其机制的研究姓名：张晓芬申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：周丽2012-02冬凌草甲素联合柔红霉素对jurkat细胞的增殖抑制作用及其机制的研究研究生：张晓芬专业：内科学导师：周丽教授中文摘要目的冬凌草甲素(OridoIlill)是一种从冬凌草植物(Rabdosanlbescens)中提取出来的具有生物学活性的四环二帖类化合物，研究发现它具有抗炎、抗菌和抗肿瘤的功效，冬凌草甲素对多种肿瘤细胞有不同程度的抑制作用，但对急性T淋巴细胞白

2、血病的研究鲜有报道本实验采用_急性T淋巴纽胞白血病讯】11囝f细胞作为体外实验研究的对象，探讨冬凌草甲素(orido血n)单用及联合柔红霉素(DNR)对iurkat细胞的增殖抑制、促凋亡作用并对冬凌草甲素诱导iurkat细胞凋亡机制的研究进行初步的探讨，为临床治疗急性T淋巴细胞白血病的新药开发利用提供一定的实验依据。方法采用CCK-8检测冬凌草甲素单用及联合化疗药物柔红霉素作用于jurkat细胞24h、48h、72h后的增殖抑制作用；利用相差显微镜、Giemsa染色、罗丹明123荧光染色观察冬凌草甲素作用于iurk

3、at细胞48h后的形态学变化；加ⅡlexiIlV—FITC／PI双染法检测冬凌草甲素单用及联合化疗药物柔红霉素作用于jurkat细胞48h后凋亡的影响；为进一步明确冬凌草甲素诱导jⅢkat细胞凋亡的部分作用机制，在第二部分实验中采用流式细胞仪检测冬凌草甲素作用于j破at细胞48h后的周期分布变化；罗丹明123检测冬凌草甲素作用于j咄at细胞48h后的荧光强度；caSpase一3酶活性检测冬凌草甲素作用于jurkat细胞48h后的caSpase一3酶活性变化。结果1、CCK-8检测jurkat细胞的增值抑制作用CCK

4、．8试剂盒检测表明相同时间下，随着药物浓度的增加，吸光度值逐渐降低；相同药物浓度下，随着作用时间的延长，吸光度值逐渐减低，表明冬凌草甲素对jurkat细胞的作用呈现一定的剂量．时间依赖性。取对jurkat细胞抑制作用最弱的1u咖l柔1红霉素联合不同浓度的冬凌草甲素共同作用于jurkat细胞，其抑制作用高于单用柔红霉素及冬凌草甲素，且差异具有统计学意义(P<0．05)，金氏公式判断冬凌草甲素联合柔红霉素对j咄at细胞具有协同抑制效应。2、细胞形态学观察相差显微镜下，随着药物浓度的增加，细胞密度逐渐减低，边缘不清，亮度

5、逐渐减弱，呈现膜皱缩、核破裂等溶解性坏死等变化；Giemsa染色观察空白对照组细胞边缘光滑，染色质紫红色，伴随药物浓度的增加，胞膜皱缩，细胞核边集，空泡变性、染色质密集浓染，部分观察到凋亡小体等凋亡形态学变化；罗丹明123染色观察随着药物浓度的增加，jurkat细胞呈现胞体萎缩，细胞荧光染色强度减弱等表现。3、AnnexinV．FITC／PI双染法检测药物对jurkat细胞的凋亡率流式细胞仪检测结果显示：不同浓度的冬凌草甲素(1肛咖l、2肛g／m1、4删、8斗g／rnl、16肛g／m1)处理组作用于jurkat细胞

6、48h后的凋亡率分别为7．74士O．96％、13．26土1．49％、17．42士1．24％、25．13士2．12％、29．07士0．59％，与空白对照组相比差异具有统计学意义，柔红霉素最低诱导凋亡浓度(0．04“g／m1)联合接近IC50浓度的冬凌草甲素(4肛鲋m)共同作用于j删kat细胞48h，其凋亡率明显高于单用柔红霉素、冬凌草甲素的凋亡率，差异具有统计学意义。4、冬凌草甲素对细胞周期分布变化的影响流式细胞仪检测表明：不同浓度的冬凌草甲素(1删、2¨咖1l、4“咖l、8p咖l、16斗幽=111)处理组作用于ju

7、rkat细胞48h后，随着药物浓度的增加，Gl期细胞比例分别为33．96士1．15％、36．04士0．30％、37．05士0．18％、37．59士O．76％、38．77±1．58％、47．71士4．94％，其中8p咖l、16删冬凌草甲素处理组与空白对照组相比，差异具有统计学意义(P<0．05)；S期细胞呈减少趋势，各浓度处理组与空白对照组相比，差异均具有统计学意义(P<0．05)。实验表明冬凌草甲素影响细胞周期分布，可诱导j咄at细胞阻滞于G1期。5、罗丹明123检测冬凌草甲素对jurl‘at细胞膜电位的影响FCM

8、检测表明：随着药物浓度的增加，荧光强度呈浓度依赖性降低，各浓度处理组的荧光强度分别为3806．79士186．30、3516．43士223．86、3072．41土28．52、665．82士85．39、193．08士3．70，与空白对照组相比，除第一处理组外，差异具有统计学意义(F=302．584，P<0．05)，实验表明冬凌草甲素可诱导jurkat细胞膜电位降