冬凌草甲素对人鼻咽癌细胞cne2的抑制作用论文

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1、冬凌草甲素对人鼻咽癌细胞CNE2的抑制作用论文朱国臣，肖大江，张亚男，吴四海，袁渊，黄红宇，魏云玉【摘要】目的探讨冬凌草甲素对人鼻咽癌细胞E2的抑制作用，为其临床应用提供理论依据。方法SRB法检测冬凌草甲素对E2细胞生长的抑制作用.freeloreeffectivelychemotherapeuticagentsandtreatmentregimens,annasopharyngealcancerlineE-2.MethodsCellgroediatedbyOridoninonE-2cellsinedbyfloetry.

2、ResultsThegroannasopharyngealcancerlineE-2ainlynecroticcellsandapoptoticcells.“SubG1”phasepeaketry.OridonincouldcauseE2cellscycletochange.phasecellpercentageincreased.ConclusionApoptosisandnecrosisarethekeymechanismforOridonin'skillingactioninhumannasopharyngealcan

3、cerlineE2,anNasopharyngealCancer；Apoptosis；Necrosis冬凌草甲素(oridonin)是从冬凌草中提取出来的有效抗癌成分，其主要化学结构是一种四环二萜类化合物，有研究表明其对白血病以及食管癌、肝癌、结肠癌等有一定的疗效［1～4］。本研究通过SRB法检测细胞存活率、流式细胞仪分析细胞周期的变化、检测细胞凋亡的发生等手段观察冬凌草甲素对于人鼻咽癌细胞E2株的抑制作用，以期为临床应用提供理论依据。1材料和方法1.1材料和仪器人鼻咽癌细胞系E2购于中国科学院上海细胞生物所，冬凌草甲素（

4、纯度＞98%）购于中国科学院昆明植物研究所，AnnexinV凋亡检测试剂盒购于Biovision公司，PI（碘化丙啶）购于Sigma公司，荧光显微镜为Leica公司产品，流式细胞仪为BeckmanCoulter公司产品。1.2细胞培养细胞培养基为RPMI1640（美国GibcoBRL公司），补充10%胎牛血清（杭州四季青公司）、100IU/ml青霉素和0.1mg/ml链霉素。细胞培养用50ml培养瓶，置于37℃，5%CO2培养箱在全湿条件下培养。1.3SRB法检测细胞存活率将增殖良好并处于对数生长期的E2细胞经0.25%胰酶

5、及EDTA各半的消化液分散后计数，制成细胞悬液，接种于96孔板内，100μl/孔。预培养24h后，每孔加入不同浓度的冬凌草甲素100μl/孔（6.25，12.5，25，50，75，100，200μmol/L）每个药物浓度设6个复孔，并设空白对照(RPMI1640培养液)和正常对照（不加药物，加等量生理盐水），置于37℃，5%CO2培养箱在全湿条件下培养48h。然后参照Skehan's法，取出培养板，每孔加入50%的三氯醋酸50μl固定细胞，然后在4℃冰箱中放置1h。三蒸水洗涤、干燥后，每孔加入0.4%SRB100μl，室温下放

6、置30min，弃去各孔内液体后用1%乙酸洗涤5遍，干燥后用pH为10.5的10mmol/L三羟甲基胺基甲烷溶解，在平板振荡器上振荡5min，在酶联免疫检测仪上测定A值，用空白对照调零，所用波长509nm。计算出药物对细胞生长抑制率。生长抑制率=(对照组A值实验组A值)/对照组A值×100%。1.4流式细胞仪检测1.4.1AnnexinV标记检测收集不同浓度药物作用后的细胞，分别制备成0.5mlPBS单细胞悬液，先后加入凋亡试剂盒中AnnexinVFITC和PI各5μl，室温下避光染色10min，上流式细胞仪检测，软件分析结

7、果。未加药组为对照组。1.4.2细胞周期检测收集不同浓度药物作用后的细胞，70%冷乙醇固定过夜，PBS清洗，200μlRnaseA37℃水浴消化30min，800μlPI避光染色30min，上流式细胞仪进行细胞周期和凋亡峰检测。未加药组为对照组。1.5统计学分析所得数据经SPSS10.0forol/L浓度时，E细胞的抑制率分别为4.56%，13.78%，53.51%，68.92%，77.84%，91.26%。可以看出冬凌草甲素对E-2细胞生长抑制率随着浓度的增加而增加，冬凌草甲素的半数抑制率IR50为24.3μmol/L。2.

8、2冬凌草甲素对细胞凋亡的影响AnnexinVFITC和PI染色将细胞分为四种属性，其中I象限：AnnexinV低染、PI高染，为机械损伤细胞；II象限：AnnexinV和PI均高染，为坏死细胞；III象限：AnnexinV和PI均低染，为正常细胞；IV象限：AnnexinV