重组变构人trail联合柔红霉素对白血病细胞诱导凋亡作用及其机制的研究论文

《重组变构人trail联合柔红霉素对白血病细胞诱导凋亡作用及其机制的研究论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、重组变构人TRAIL联合柔红霉素对白血病细胞诱导凋亡作用及其机制的研究论文张学军温丽王福旭罗建民潘崚刘小军杜行严董作仁杨世芳【摘要】为了研究重组变构人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（rebinanatmutanthumanTRAIL,rmhTRAIL）单用及与柔红霉素（DNR）联合应用对白血病细胞株U937、K562的诱导凋亡作用及其机制，以正常人胚肺成纤维细胞株MRC-5作对照，采用MTT法检测体外培养的U937、K562白血病细胞株在rmhTRAIL单用和联合DNR作用下增殖的抑制效应；用半定量逆转录多聚酶链反应（RT-

2、PCR）法检测DNR处理前后白血病细胞TRAIL死亡受体和诱杀受体的mRNA表达水平。结果表明：rmhTRAIL对白血病细胞株U937、K562有较明显的抑制增殖作用，DNR与TRAIL联合对抑制肿瘤细胞具有协同性，与各药单独使用比较均有显著差异（P0.05）；经DNR作用后，U937、K562细胞的死亡受体DR4、DR5水平上调，而两种诱杀受体DcR1、DcR2表达未受影响。结论：在体外rmhTRAIL单用或与DNR联用均能明显抑制白血病细胞增殖，rmhTRAIL与DNR对白血病细胞的杀伤有协同作用.freelhTRAI

3、L；U937细胞；K562细胞；柔红霉素binedEffectofRebinantMutantHumanTRAILandDaunorubicininInducingApoptosisofLeukemiaCellandItsMechanismAbstractTheaimofstudytmuctanthumanTRAIL(rmhTRAIL)iacelllinesanditsmechanism.Thefibroblasts(MRC-5)ofnormal-humanembryoniclunghTRAILandDNRoronlyTR

4、AIL,thecytotoxiceffectandtheapoptosisrateinK562,U937cellseasuredbyMTTassay.TheexpressionlevelsofTRAILdeathreceptorandTRAILdecoyreceptormRNAinthesethreecelllinesiquantitiveRT-PCRbeforandaftertreatmenthTRIAL.DNRhadsynergisticinhibitoryeffecthTRAILonthegroRNAentofrmh

5、TRAILandDNRthanthatinthosealone,RNAhTRAILaloneorinbinationiacelllinesandinducecellapoptosis,DNRandrmhTRAILhaveasynergisticinhibitoryeffectongroechanismmaycorrelatehTRAIL；U937cell；K562cell；daunorubicin肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TNF-relatedapoptosis-inducingligand，TRAIL）是新近发现的肿

6、瘤坏死因子超家族成员,可特异性地诱导肿瘤细胞凋亡而对正常细胞无明显杀伤作用。野生型TRAIL在稳定性、溶解性及生物活性等方面存在不足，重组变构人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（rebinantmutanthumanTRAIL，rmhTRAIL）是由北京沙东公司对野生型TRAIL结构进行环化变构后的优化产品，弥补了上述不足。我们以正常人胚肺成纤维细胞株MRC-5作对照，检测rmhTRAIL单用及联合柔红霉素（daunorubicin,DNR）对人急性单核细胞白血病细胞株U937、人慢粒红白血病变细胞株K562的促凋亡作用，并在

7、mRNA水平分析化疗药作用前后其两种TRAIL死亡受体DR4、DR5（deathreceptor4、5）和两种TRAIL诱杀受体DcR1、DcR2（decoyreceptor1、2）表达的变化，探讨rmhTRAIL治疗急性白血病的可能性及其机理，为rmhTRAIL作为新的抗肿瘤生物制剂治疗血液系统肿瘤提供理论依据。材料和方法主要试剂RPMI1640培养粉、MEM培养粉、TRIzoL试剂、胰蛋白酶、四甲基偶氮唑蓝（MTT）和二甲亚砜（DMSO）均购自Gibco公司。新生牛血清为杭州四季清生物公司产品。rmhTRAIL冻干粉由

8、北京沙东生物技术有限公司提供。柔红霉素为意大利S.P.A公司产品。引物由北京赛百盛公司合成。随机引物、M-MLV逆转录酶、TaqDNA聚合酶均购自美国Promega公司。细胞株及培养K562细胞株由本实验室提供，U937细胞株、MRC-5细胞株均引自北京沙东生物技术有限公司。3种细胞均在37℃、5%CO