cd59基因抗hene激光诱导凋亡的作用

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1、CD59基因抗HeNe激光诱导凋亡的作用【关键词】抗原CD95基因bcl2NFκB激光[ABSTRACT]ObjectiveTostudytheeffectofCD59geneonapoptosisofHeLacellinducedbyHeNeLaser.MethodsHeLacellsiceingroupⅠ,andHeLacellstransfectediceingroupⅡ.After24hoftheinjection,themicereceivedHeNelaserradiation.ExpressionsofFas

2、,bcl2andNFκBintumortissueonstratedviaimmunohistochemistrytechnique.Resultsparedoraypromotetheexpressionsofbcl2andNFκB,suggestingitsantiapoptosiseffect.[KEY2,照射距离为50cm,光斑直径为0.5cm,原束照射。照射部位为脾区(瘤区),每日照射激光1次,每次10min共15d,实验第16天处死小鼠。1.4Fas、bcl2、NFκB蛋白免疫组织化学检测检测步骤按试剂盒

3、说明书操作。1.5结果判定免疫组化染色胞浆或(和)胞膜呈棕黄色为阳性结果。参照文献[3,4]的方法,随机选取5个高倍视野(400倍),首先根据阳性细胞所占的百分比记分,阳性细胞数<5%为0分,5%~25%为1分,26%~50%为2分,51%~75%为3分,76%~100%为4分。再根据阳性细胞显色强度记分:无着色为0分,轻度染色为1分,中度染色为2分,重度染色为3分,两者得分之和即为阳性蛋白表达结果,其中<1分为阴性,2~3分为弱阳性(+),4~5分为中等阳性(),6~7分为强阳性()。2结果2.1两组成瘤率及肿瘤

4、质量比较Ⅰ、Ⅱ组小鼠的成瘤率分别为87.5%、81.1%,瘤块的质量分别为(0.848±0.047)g、(1.239±0.058)g,两组的瘤质量比较差异有显著意义(t=9.169,P<0.05)。2.2两组肿瘤组织中Fas、bcl2、NFκB蛋白表达Fas、bcl2蛋白的表达定位于胞膜及(或)胞浆,阳性细胞多为弥漫分布,少数呈局灶性分布,其中两组Fas蛋白阳性染色程度无明显差别(图1、2);Ⅱ组bcl2蛋白阳性染色程度较Ⅰ组明显加深(图3、4)。NFκB蛋白的表达定位于胞核,阳性细胞的表达呈片状或簇状分布,Ⅱ组染色程度

5、较Ⅰ组明显加深(图5、6)。图1Fas在Ⅰ组肿瘤组织中表达免疫组织化学染色×100图2Fas在Ⅱ组肿瘤组织中表达免疫组织化学染色×100图3bcl2在Ⅰ组肿瘤组织中表达免疫组织化学染色×100图4bcl2在Ⅱ组肿瘤组织中表达免疫组织化学染色×100图5NFκB在Ⅰ组肿瘤组织中表达免疫组织化学染色×100图6NFκB在Ⅱ组肿瘤组织中的表达免疫组织化学染色×1002.3Fas、bcl2、NFκB蛋白在肿瘤细胞中表达的比较在肿瘤组织中,Ⅱ组Fas蛋白的表达与Ⅰ组比较无显著差异(Z=-0.643,P>0.05),而Ⅱ组bcl

6、2、NFκB的表达较Ⅰ组显著升高(Z=-2.328、-2.367,P<0.05)。见表1。表1两组肿瘤组织Fas、bcl2、NFκB蛋白表达的比较3讨论Fas、bcl2、NFκB基因是与细胞凋亡相关的信号分子。免疫细胞具有Fas配体,其可与肿瘤细胞Fas结合,通过激活caspase引起细胞凋亡[5]。bcl2基因在细胞抗凋亡中扮演重要角色,主要通过以下几种方式发挥抗凋亡作用:①bcl2基因能与细胞中bax基因结合,这种结合对bcl2基因抗凋亡起重要调控作用,其比值决定了细胞接受凋亡信号后的存活与否,如果bax基因占

7、优势时细胞死亡,而bcl2基因占优势时细胞生存。②凋亡中DNA的消化需要相关的Ca2+依赖性核酸内切酶的参与,而bcl2基因也可以阻断Ca2+从内质网的释出,使依赖于Ca2+的核酸内切酶活性降低,从而阻断细胞凋亡。③bcl2基因是通过调节抗氧化途径来抑制细胞凋亡[6,7]。近年来发现,NFκB的激活可以促进肿瘤的生长,在肿瘤的治疗中是研究的热点,其具体机制尚在探讨中[8,9]。CD59是补体终末段的一种调节蛋白,它具有抑制膜攻击复合物形成,保护正常组织免受补体溶解的作用。近年来,国外报道已在多种实体瘤细胞中,如子宫内膜癌、

8、前列腺癌、黑色素瘤及肠道肿瘤等发现有CD59分子的过表达,并与肿瘤细胞的抗凋亡及肿瘤的失控性生长和恶性转化密切相关[10,11]。因此,CD59分子已逐渐成为研究肿瘤细胞抗凋亡、逃逸自身免疫监视及肿瘤导向治疗中新的热点。本研究旨在探讨肿瘤细胞表面C

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