应用甲基丙烯酸甲酯包埋不脱钙骨组织方法的探讨

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1、应用甲基丙烯酸甲酯包埋不脱钙骨组织方法的探讨.L.编辑。作者：谭见容，杨小红　康宁，王文，陈鸿辉，梁伟国【摘要】[目的]本研究通过改进既往标本制作方法，探讨应用不同浓度聚甲基丙烯酸甲酯对骨组织包埋效果的影响，寻找不脱钙骨组织标本包埋制作的理想方法。[方法]骨组织标本取材后，用10%中性福尔马林固定24h，梯度酒精脱水、二甲苯透明，转入含有15g/L过氧化苯甲酰的甲基丙烯酸甲酯(UMMA)中，每24h换液1次。从转入UMMA渗透液开始，每天抽滤30min，以排除组织中的气体。MMA聚合过程分为3个实验组，分别以30g/L、35

2、g/L、40g/L三种筛选浓度加入过氧化苯甲酰，密切观察样本聚合情况。[结果]3种浓度及凝结时间观察比较，加速剂浓度为35g/L的标本，在室温25℃左右，约7d时间开始凝结，并逐渐变硬，组织与包埋剂的硬度均匀，效果理想，制作的切片直接在荧光显微镜下观察，可见两种清晰的矿化标记;加速剂浓度为40g/L的标本，约3～4d开始凝结，但出现大量气泡影响观察及制片，效果欠佳;加速剂浓度为30g/L的标本，观察30d仍未见凝结。[结论]过氧化苯甲酰浓度为35g/L的包埋剂对不脱钙骨组织包埋效果最为理想，应用本研究方法能为骨科基础研究领域

3、相关研究提供有效的硬组织制作技术平台。【关键词】甲基丙烯酸甲酯;不脱钙骨;包埋　　Abstract:[Objective]ToinvestigatetheeffectoftheapplicationofdifferentconcentrationsofPMMAinembeddedbonetissuebyimprovingtheproductingprocess,itedtolookfortheidealembeddedmethodofproducingnon-demineralizedbonetissuesamples.[M

4、ethods]Thespecimensaldehyde,anddehydratedbyconcentrationgradientalcohol,andthenmadetransparentbyxylene.Theyensineveryday,inordertoeliminatethegasintissue.Thespecimenserizationsituationofthespecimenseofthreedifferentconcentrations,theresultensbegantocondensateafter7

5、daysandhardenedgradually,thehardnessoftissueandembeddingmediumimeralmarkcouldbeseenclearlyicroscope;ensbegantocondeseafter3～4daysandbubbleakingsections;thespecimensadebyacceleratoroftheconcentrationof30g/Ldidn'tcondenseafter30days.[Conclusion]MA)聚合包埋技术，对不脱钙骨组织标本进行包

6、埋，评价不同浓度聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)对包埋效果的影响，寻找PMMA包埋的最佳浓度及时间。　　1材料与方法　　1.1材料　　1.1.1主要试剂甲基丙烯酸甲酯(购自德国Merck公司)，荧光剂钙黄绿素及二甲苯酚橙均为Sigma产品，过氧化苯甲酰、二甲苯、氢氧化钠、氯化钠、无水氯化钙、乙醇均为广州化学试剂厂产品。　　1.1.2主要仪器　　普通荧光图像采集用ZEissAxiovert200M电动荧光显微镜，高压汞灯，绿色宽带滤片(#9，ZEIss)及红色宽带滤片(#15，Zeiss)，数码彩色CCD(电荷耦合器)摄像机(Ca

7、meraAxioCamMRcRev.2，1388×1040，Zeiss);锯式切片机(LeicaSP1600)。　　1.1.3实验动物　　新西兰成年白兔购自广东省医学实验动物中心，在本所普通级动物实验中心进行常规饲养和观察。　　1.2方法　　1.2.1试剂配制　　1.2.1.1洗涤剂称取氢氧化钠50g，氯化钠200g，加蒸馏水至1000ml溶解备用。　　1.2.1.2过氧化苯甲酰(市售试剂含水)使用前作干燥处理，将试剂盛于玻璃平皿，置干燥器待水分吸干备用。　　1.2.1.3MMA准备:(1)洗涤：洗去MMA单体中的阻聚剂，将

8、MMA与洗涤剂按2∶1体积比加入分液漏斗，充分摇匀，静置分离，弃去下层，共2次;(2)用蒸馏水洗3次，方法同上;(3)吸水：无水氯化钙吸水30min，过滤去水;(4)贮存：2～4℃保存。　　1.2.1.4UMMA配制：加速剂过氧化苯甲酰1.5g溶于100mlMMA中，浓度为15g/L，2～