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1、中国骨质疏松杂志 2006年4月第12卷第2期 ChinJOsteoporos,April2006,Vol12,No.2159·论著·人类不脱钙骨组织的免疫组化与原位杂交李朵 魏启幼 袁凌青 蒋谊 肖新华 戴如春 廖二元摘要:目的 探讨在人类不脱钙骨组织切片上行免疫组化和原位杂交技术的可行性。方法 采用Erben报道的改进的甲基丙稀酸甲酯低温塑料包埋方法包埋人类髂骨活检组织,制备不脱钙骨组织切片。切片行Goldnerps三色法及甲苯胺蓝染色观察骨组织的形态结构;采用免疫组化S2P法和原位杂交技术检测骨组织中碱性成纤维细胞生长因子(FGF22)蛋白和mRNA的表达。结果 组织形态学上
2、,两种染色法均示骨组织中成骨细胞、破骨细胞及骨细胞清晰可辨,钙化的骨基质与类骨质分界清楚。免疫组化和原位杂交示FGF22蛋白和mRNA表达于骨髓腔中一些单个核细胞及少许成骨细胞的胞浆中。此外,骨髓基质亦可见FGF22蛋白和mRNA的阳性表达。结论 低温塑料包埋方法制备的人类不脱钙骨组织切片可同时进行免疫组化和原位杂交的检测观察。关键词:甲基丙稀酸甲酯;不脱钙骨组织;免疫组织化学;原位杂交;人类ImmunohistochemistryandinsituhybridizationtechniqueforundecalcifiedbonesectionsofhumanLIDuo,WEIQ
3、iyou,YUANLingqing,etal.TheSecondXiangyaHospitalofCentralSouthUniversity,Changsha410011,ChinaAbstract:ObjectiveToexplorethefeasibilityofapplyingimmunohistochemistry(IH)andinsituhybridization(ISH)techniquetotheundecalcifiedbonesectionsofhuman.MethodsTwoiliaccreastbiopsieswereembeddedwiththemethy
4、lmethacrylate(MMA)low2temperatureplasticembeddingmethodreportedbyErbenandthenmadeintoundecalcifiedsections.ThesesectionswereobservedinmorphologybyGoldnerpsMassonTrichromestainingandtoluidinebluestaining.FGF22proteinandmRNAinthebonesectionsweredetectedbyIHandISH.ResultsBothGoldnerpsMassonTrichr
5、omestainingandtoluidinebluestainingshowedthecellsinbonetissuesuchasosteoblast,osteoclastandosteocytewereclearlyseen,andosteoidwereeasilydistinguishedfrommaturebonetissue.ThepositivesignalsofFGF22proteinandmRNAwerefoundinthecytoplasmofsomemononuclearcellsinthebonemarrowandosteoblast,thematrixin
6、thebonemarrowwaspositivelystained,too.ConclusionsTheundecalcifiedbonesectionsofhumanmadeinthemethodcansatisfytheneedofIHandISH.Keywords:Methylmethacrylate;Undecalcifiedbonetissue;Human;Immunohistochemistry;Insituhybridization 不脱钙骨组织能良好地保存骨小梁的结构,正功。确反映骨生长与矿化方面的信息而具有了脱钙骨组1 材料和方法织无法比拟的优越性,但因其对抗原
7、保存性差,所以用不脱钙骨组织切片行免疫组化与原位杂交有一定111 实验标本的难度。目前,用大鼠不脱钙骨组织行免疫组化与2块松质骨组织:一块取自一36岁男性患者的原位杂交已获得了成功,但国内,人类或大动物的不髂骨(骨软化症患者,行髂骨活检);另一块取自一脱钙骨组织行免疫组化与原位杂交却仍是空白。本48岁男性患者的髂骨(第7颈椎骨折,需髂骨植实验室对人类的髂骨进行了低温塑料包埋,制得不骨)。以上均经患者本人同意。脱钙骨组织切片后行免疫组化与原位杂交取得了成112 试剂与器
