尾加压素ⅱ促进肾系膜细胞增殖的细胞内机制研究

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1、尾加压素Ⅱ促进肾系膜细胞增殖的细胞内机制研究【摘要】目的：研究尾加压素Ⅱ(UⅡ)对肾系膜细胞(GMC)增殖功能的影响以及细胞内信号转导机制。方法：①采用［3H］_胸腺嘧啶(3H_TdR)掺入实验研究UⅡ对GMC增殖的影响。②加入不同的细胞内信号转导阻断剂，观察UⅡ作用的信号转导通路。结果：UⅡ以浓度［(10-9～10-7)mol/L］依赖的方式促进GMC　3H_TdR掺入，分别较对照组高86.9%、105.8%和134.2%(P<0.01)。UⅡ刺激3H_TdR掺入的效应能够被L_钙通道阻断剂尼卡地平、钙调素激酶(CaM_PK)阻断剂C增殖，该效应与胞外Ca2+内流、CaM_PK以及PK

2、C有关，并提示UⅡ可能在肾纤维化发生和发展过程中发挥着重要作用。【关键词】肾系膜细胞增殖尾加压素信号转导　　MechanismsofProliferationEffectofUrotensinⅡonGlomerularMesangialCellsofRats　　ZHANGYong_gang，edicalCollege,Shantou515041,China；Departmentofinternalmedicine,TheSecondAffiliatedHospital,ShantouUniversityMedicalCollege,Shantou515041,China；Instituteof

3、CardiovascularResearch,PekingUniversityFirstHospital,Beijing100034,China)　　［Abstract］Objective:ToinvestigatetheproliferationeffectofurotensinⅡ(UⅡ)onglomerularmesangialcells(GMC)ofrats，andtostudythesignaltransductionpathinedbytheincreasein3H_thymidine(3H_TdR)incorporationintoDNA.Differentinhibitorsol

4、/L］induced3H_TdRincorporationinaconcentration_dependentmanner,ol/Lgroups,respectively,paredol/L),proteinkinaseC(PKC)inhibitorH7(10-5mol/L)andCaM_PKinhibitorCproliferation,throughCa2+,PKCandCaM_PKsignaltransductionpathayplayimportantrolesinthedevelopmentofrenalfibrosis．　　［KeyC)上探讨UⅡ刺激细胞增殖的作用及其细胞内机制。　

5、　1材料与方法　　1.1材料　　SD大鼠由北京大学医学部实验动物部提供(中国)，大鼠UⅡ(纯度>99.5%)为PhoenixPharmInc产品(美国)。RPMI1640培养基、钙通道阻断剂尼卡地平(NI)、蛋白激酶C(PKC)抑制剂H7、钙调素激酶阻断剂APK)阻滞剂PD98059为Sigma公司(美国)产品，3H_胸腺嘧啶(3H_TdR)为Amersham　Pharmacia　Biotech公司(德国)产品，余为市售分析纯试剂。　　1.2方法　　1.2.1大鼠肾小球分离和GMC培养见参考　　本研究在体外培养的GMC上，采用3H_TdR掺入法，发现UⅡ能够以浓度依赖的方式促进细胞3H_

6、TdR掺入增加，促进细胞增殖。该作用能够分别被Ca2+通道阻断剂NI、钙调素激酶阻断剂_PK以及PKC都能够影响对GMC的促增殖效应。然而，PD98059不影响UⅡ的效应，提示受体酪氨酸激酶_MAPK细胞增殖途径可能不是UⅡ促GMC增殖的主要途径。UⅡ的病理、生理意义及其作用机制是近年的研究热点之一。我们在国内首先报道了UⅡ的促丝裂效应。在培养的血管平滑肌细胞上，发现UⅡ能够促进细胞增殖，该作用需通过Ca2+、PKC、CaM_PK以及MAPK来实现［13］。我们还发现UⅡ能够促进新生乳鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原分泌，其增殖效应与细胞外Ca2+内流、CaM_PK以及PKC激活有关，而促胶原合成作

7、用可能通过其它途径来实现［22］。在慢性缺血所致肺动脉高压右心肥大大鼠上，我们发现右心室UⅡ以及受体结合位点明显上调，而血浆UⅡ水平并无明显变化，提出UⅡ可能主要以自分泌和旁分泌作用方式发挥效应这一观点［19］。上述结果进一步被其他学者所证实［4,9］。最近我们还发现UⅡ能够通过Ca2+、PKC以及MAPK途径刺激大鼠主动脉组织合成和释放内皮素_1［23］。一系列研究表明，UⅡ可通过GPR14受体