尾加压素ⅱ对体外培养大鼠肾成纤维细胞的促增殖作用

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1、尾加压素Ⅱ对体外培养大鼠肾成纤维细胞的促增殖作用作者：王丹李才李相军齐玲尹俐高海成【摘要】目的观察尾加压素Ⅱ(UrotensinⅡ，UⅡ)对大鼠肾间质成纤维细胞(RFB)的促增殖作用,探讨UⅡ在肾纤维化发生发展中的作用。方法体外培养大鼠肾成纤维细胞并鉴定，采用MTT法、流式细胞仪(FCM)法分别观察不同浓度UⅡ作用下，大鼠肾成纤维细胞数、细胞周期的变化。结果UⅡ可以促进RFB的增殖活性，随着UⅡ作用浓度的增加，MTT吸光度值呈先升高后降低的趋势，其中1×10-9和1×10-8mol/LUⅡ组作用显著(P＜0.05)；在1×10-10，1×1

2、0-9，1×10-8，1×10-7mol/LUⅡ作用下，RFBS期细胞百分率均较对照组明显增加，而G0G1期细胞百分率均较对照组明显降低(P＜0.01)；在1×10-7mol/LUⅡ作用下,上述各参数与对照组比较无统计学意义(P＞0.05)。结论UⅡ能促进大鼠肾成纤维细胞增殖，影响细胞周期，这可能提示UⅡ在肾纤维化发生和发展过程中发挥着重要作用。【关键词】尾加压素Ⅱ；成纤维细胞；增殖【Abstract】ObjectiveToobservetheeffectsofurotensinⅡ(UⅡ)ontheproliferationofthere

3、nalinterstitialfibroblasts(RFB)ofratsandexploretheroleofUⅡintherenal8interstitialfibrosis.MethodsRFBfromWistarratswereisolatedandcultured.CellnumberwasobservedbyMTTassay.Cellcyclewasevaluatedbyflowcytometry(FCM).ResultsWiththeincreaseofurotensinⅡconcentration,theopticalden

4、sityat490nmofRFBasshownbyMTTassaywasfirstincreasedbutthendecreased,andremainedatasignificantlyhigherlevelinthecellstreatedwith1×10-9or1×10-8mol/LUⅡcomparedwiththoseincontrolgroup(P＜0.05).Withthetreatmentof1×10-10，1×10-9，1×10-8，1×10-7mol/LUⅡ,theSphasecellpercentageweresigni

5、ficantlyhigher,andtheG0G1phasecellpercentagewassignificantlylowerthanthoseincontrolgroup(P＜0.01，P＜0.05),buttheindicesin10-7mol/LUⅡgroupwerenotsignificantlydifferentfromthoseofcontrol(P＞0.05).ConclusionsUⅡcandirectlyinduceRFBproliferationandaffectthecellcycle,whichsuggests

6、thecrucialroleofUⅡintherenalinterstitialfibrosis.【Keywords】UrotensinⅡ;Renalinterstitialfibroblasts;Proliferation　　尾加压素Ⅱ(UrotensinⅡ，UⅡ)是一种生长抑素样环肽，最早从硬骨鱼脊髓尾部下垂体中分离而来，缩血管效应是内皮素1(ET81)的10倍多〔1〕。近年国内外的研究相继发现UⅡ并非仅有血流动力学作用，其在肾脏的高表达有可能有重要的意义〔2〕。目前UⅡ对肾间质纤维化的作用研究尚未见报道。本研究观察了UⅡ对大鼠肾成

7、纤维细胞增殖、细胞周期的影响，旨在探讨UⅡ在肾间质纤维化中可能发生的作用。　　1材料与方法　　1.1主要试剂　　体重100gWistar大鼠由吉林大学实验动物中心提供，DMEM培养基(Gibco)，标准胎牛血清(天津灏洋生物技术有限公司)，Urotensin(UⅡ)(Sigma)，免疫组织化学SABC试剂盒和DAB显色剂(武汉博士德公司)。　　1.2大鼠肾成纤维细胞的培养与鉴定　　大鼠肾间质成纤维细胞从正常Wistar大鼠肾髓质中培养获得。参考Rodemann等〔3〕的方法进行分离培养。具体步骤为：将肾髓质切成1mm3小块，加入0.25%胰

8、酶37℃消化10～15min，将消化后组织悬液过200目筛网，滤液于1000r/min离心10min，弃上清，用培养液洗涤两次，加入含20%胎牛血清的培养液，置37℃8、5%CO