仙人掌对体外培养成纤维细胞生长增殖的影响

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1、仙人掌对体外培养成纤维细胞生长增殖的影响：金照，金可可，陈雷，刘长宝【摘要】目的：观察仙人掌对体外培养成纤维细胞增殖的影响及其量-效关系。方法：以小鼠成纤维细胞株(NIH3T3)为研究对象，采用四氮唑盐(MTT)比色法测定仙人掌对成纤维细胞增生的影响(以OD值反映细胞活性)，采用免疫细胞化学染色法检测成纤维细胞的增殖细胞核抗原(PA)的表达。结果：在一定浓度范围内(0.0625～0.5mg/mL)，仙人掌能明显促进体外培养的成纤维细胞生长增殖，同时促进PA蛋白的表达，并随着仙人掌浓度的增加，成纤维细胞数量和PA蛋白的表达均不断增加，在0.5mg/mL浓度时达到高峰，呈现明显的

2、剂量-效应关系(r分别为0.761，0.783;P均<0.01)。结论：在一定浓度范围内，仙人掌具有促进体外培养成纤维细胞增殖的作用，并表现为明显的量-效关系。【关键词】仙人掌;成纤维细胞;增殖　　Abstract:Objective:ToexploretheeffectsofOpuntiaonfibroblastproliferationinvitroanditsconcentration-effectrelationship.Methods:TheeffectsofOpuntiaonproliferationoffibroblasteasuredetricassay

3、，andPAproductionsinedmunocytechemistry.Results:OpuntiacouldprovokefibroblastproliferationandincreasePAproteinexpressioninconcentrationrange0.0625～0.5mg/mL.Furthermore，theeffectsexhibitedasignificantconcentration-dependentrelationship(r=0.761，0.783respectively，P<0.01).Conclusion:Opuntiaca

4、nprovokefibroblastproliferationin离心5min，取上清液，调节pH值为7.0～7.4，高压蒸汽灭菌20min，冰箱中(-18℃)保存备用。　　1.2.2采用四氮唑盐(MTT)比色法测定仙人掌对成纤维细胞增殖的影响：取NIH3T3对数生长期细胞常规消化，调整细胞为5×104个/mL，以每孔104个细胞密度接种于96孔培养板中，37℃、5%CO2条件下培养。细胞贴壁后随机分成6组，第1组只加入无血清DMEM50μL作为空白对照组;2～6组加入等量的用无血清DMEM配制的仙人掌干粉液，浓度分别为：0.0625、0.125、0.25、0.5、1mg/m

5、L。37℃5%CO2条件下培养48h，吸出培养液，各孔加入20μL的MTT液(以不含血清的DMEM高糖培养基配置，浓度为5mg/mL)，继续培养4h，小心吸弃培养液，加入150μL二甲基亚砜(DMSO)，振荡10min，使结晶物充分溶解。应用酶标仪490nm处测定各孔的吸光值(OD值)。　　1.2.3免疫细胞化学技术测定仙人掌对成纤维细胞表达增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen，PA)的影响：将NIH3T3细胞接种于含玻片的12孔板中培养24h，细胞贴壁后第1组只加无血清DMEM作为空白对照组;第2～第6组加入等量的用无血清DMEM配

6、制的仙人掌干粉液，浓度分别为0.0625、0.125、0.25、0.5、1mg/mL。培养48h后撤药，加入含体积分数20%胎牛血清的DMEM液继续培养24h，取出长有细胞的玻片固定，用鼠抗人细胞PA单克隆抗体作第一抗体，SABC法行免疫细胞化学染色。显微镜(×400)下计数100个细胞数，计算阳性细胞(棕黄色染色)数占细胞总数的比率。具体操作过程严格按试剂盒说明书进行。　　同时设空白对照试验：用PBS代替一抗，余步骤同上。　　1.3统计学处理方法组间比较用One-g/mL)，仙人掌能明显促进体外培养的成纤维细胞生长增殖，在0.5mg/mL浓度时达到高峰，并随着仙人掌浓度的增

7、加，成纤维细胞数量也不断增加，表现为明显的剂量-效应关系(r为0.761，P<0.01)。但是当仙人掌浓度达到1mg/mL时，不影响成纤维细胞生长增殖，见表1。　　2.2免疫细胞化学技术测定仙人掌对成纤维细胞表达PA的影响一定浓度范围内(0.0625～0.5mg/mL)的仙人掌能明显促进体外培养的成纤维细胞PA蛋白的表达，在0.5mg/mL浓度时达到高峰，并表现为明显的剂量-效应关系，即随着仙人掌浓度的增加，其表达量不断增加(r为0.783，P<0.01)。但是当仙人掌浓度达到1mg/mL时