仙人掌对体外培养成纤维细胞生长增殖的影响

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1、仙人掌对体外培养成纤维细胞生长增殖的影响作者：金照，金可可，陈雷，刘长宝【摘要】目的：观察仙人掌对体外培养成纤维细胞增殖的影响及其量-效关系。方法：以小鼠成纤维细胞株(NIH3T3)为研究对象，采用四氮唑盐(MTT)比色法测定仙人掌对成纤维细胞增生的影响(以OD值反映细胞活性)，采用免疫细胞化学染色法检测成纤维细胞的增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果：在一定浓度范围内(0.0625～0.5mg/mL)，仙人掌能明显促进体外培养的成纤维细胞生长增殖，同时促进PCNA蛋白的表达，并随着仙人掌浓度的增加，成纤维细胞数量和PCNA蛋白的表达均不断增加，在0.5mg/mL浓度时

2、达到高峰，呈现明显的剂量-效应关系(r分别为0.761，0.783;P均<0.01)。结论：在一定浓度范围内，仙人掌具有促进体外培养成纤维细胞增殖的作用，并表现为明显的量-效关系。【关键词】仙人掌;成纤维细胞;增殖　　Abstract:Objective:ToexploretheeffectsofOpuntiaonfibroblastproliferationinvitroanditsconcentration-effectrelationship.Methods:TheeffectsofOpuntiaonproliferationoffibroblastwerem

3、easuredwithMTT9colorimetricassay，andPCNAproductionswereexaminedwithimmunocytechemistry.Results:OpuntiacouldprovokefibroblastproliferationandincreasePCNAproteinexpressioninconcentrationrange0.0625～0.5mg/mL.Furthermore，theeffectsexhibitedasignificantconcentration-dependentrelationship(r=0.7

4、61，0.783respectively，P<0.01).Conclusion:Opuntiacanprovokefibroblastproliferationwithinacertainconcentrationrange，whichexhibitsasignificantconcentration-effectrelationship.　　Keywords:Opuntia;fibroblast;proliferation　　仙人掌(Opuntia)，又名神仙掌、老鸦舌、观音掌等，已经被用来治疗糖尿病、溃疡等症[1-2]。仙人掌治疗胃溃疡的机制可能与成纤维细胞的增

5、殖有关[3]。近几年来，虽然仙人掌的药理作用已成为医学热门研究方向，但有关仙人掌对体外培养的成纤维细胞增殖的影响未见报道。本研究以体外培养成纤维细胞为实验对象，观察仙人掌对成纤维细胞生长增殖的影响及其量-效关系。　　1材料和方法　　1.1材料9小鼠成纤维细胞株(NIH3T3)购自上海肯强仪器有限公司，鼠抗人PCNA单克隆抗体及其他试剂均购自武汉博士德生物有限公司。仙人掌干粉为鲜茎片80℃烘干制成，由福州日冕科技开发有限公司生产提供。　　1.2方法　　1.2.1药物处理：将仙人掌粉溶于80℃左右蒸馏水中，制成不同浓度溶液，经1500r/min离心5min，取上清液，调节pH

6、值为7.0～7.4，高压蒸汽灭菌20min，冰箱中(-18℃)保存备用。　　1.2.2采用四氮唑盐(MTT)比色法测定仙人掌对成纤维细胞增殖的影响：取NIH3T3对数生长期细胞常规消化，调整细胞为5×104个/mL，以每孔104个细胞密度接种于96孔培养板中，37℃、5%CO2条件下培养。细胞贴壁后随机分成6组，第1组只加入无血清DMEM50μL作为空白对照组;2～6组加入等量的用无血清DMEM配制的仙人掌干粉液，浓度分别为：0.0625、0.125、0.25、0.5、1mg/mL。37℃5%CO2条件下培养48h，吸出培养液，各孔加入20μL的MTT液(以不含血清的DM

7、EM高糖培养基配置，浓度为5mg/mL)，继续培养4h，小心吸弃培养液，加入150μL二甲基亚砜(DMSO)，振荡10min，使结晶物充分溶解。应用酶标仪490nm处测定各孔的吸光值(OD值)。　　1.2.39免疫细胞化学技术测定仙人掌对成纤维细胞表达增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen，PCNA)的影响：将NIH3T3细胞接种于含玻片的12孔板中培养24h，细胞贴壁后第1组只加无血清DMEM作为空白对照组;第2～第6组加入等量的用无血清DMEM配制的仙人掌干粉液，浓度分别为0.062