尾加压素ⅱ对体外培养大鼠肾成纤维细胞的促增殖作用论文

《尾加压素ⅱ对体外培养大鼠肾成纤维细胞的促增殖作用论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、尾加压素Ⅱ对体外培养大鼠肾成纤维细胞的促增殖作用论文王丹李才李相军齐玲尹俐高海成【摘要】目的观察尾加压素Ⅱ(UrotensinⅡ，UⅡ)对大鼠肾间质成纤维细胞(RFB)的促增殖作用,探讨UⅡ在肾纤维化发生发展中的作用。方法体外培养大鼠肾成纤维细胞并鉴定，采用MTT法、流式细胞仪(FCM)法分别观察不同浓度UⅡ作用下，大鼠肾成纤维细胞数、细胞周期的变化。结果UⅡ可以促进RFB的增殖活性，随着UⅡ作用浓度的增加，MTT吸光度值呈先升高后降低的趋势，其中1×10-9和1×10-8mol/LUⅡ组作用显著(P＜0

2、.05)；在1×10-10，1×10-9.freelol/LUⅡ作用下，RFBS期细胞百分率均较对照组明显增加，而G0G1期细胞百分率均较对照组明显降低(P＜0.01)；在1×10-7mol/LUⅡ作用下,上述各参数与对照组比较无统计学意义(P＞0.05)。结论UⅡ能促进大鼠肾成纤维细胞增殖，影响细胞周期，这可能提示UⅡ在肾纤维化发生和发展过程中发挥着重要作用。【关键词】尾加压素Ⅱ；成纤维细胞；增殖【Abstract】ObjectiveToobservetheeffectsofurotensinⅡ(UⅡ

3、)ontheproliferationoftherenalinterstitialfibroblasts(RFB)ofratsandexploretheroleofUⅡintherenalinterstitialfibrosis.MethodsRFBfrom).ResultsTT比色法测定。将大鼠肾成纤维细胞以1×104个/孔接种于96孔板中，加无血清培养液37℃孵育24h,使细胞生长同步化。弃上清液,加入含不同浓度UⅡ(1×10-10，1×10-9，1×10-8，1×10-7mol/L)10%小牛血清的

4、培养液培养24h，对照组和处理组均重复3次。于刺激结束前4h加入MTT20μl/孔(5g/L)，37℃继续孵育4h，终止培养,吸弃上清液,每孔加入150μlDMSO，振荡混匀10min后在酶联免疫检测仪上490nm波长处测定光吸收值,.freelin离心5min，吸除乙醇,PBS洗两次。悬浮于150μlPBS中,再加入适量RNase(1mg/ml),37℃水浴30min后,除去RNA,加碘化丙啶至50μl/ml，避光显色10min上机，用CELLQest软件分析细胞周期。1.5统计学处理所有数据以x±s

5、表示，采用SPSS11.0软件进行统计学分析，两组间比较采用方差分析。2结果2.1RFB的培养与鉴定细胞接种于培养瓶中，4～6d细胞传代，倒置显微镜下细胞呈梭形或多角形形态(图1)，培养的成纤维细胞波形蛋白阳性(图2)、细胞角蛋白阴性,该形态学和免疫组织化学结果示培养细胞系大鼠肾成纤维细胞。2.2UⅡ对肾间质成纤维细胞增殖的影响肾间质成纤维细胞经不同浓度UⅡ刺激24h后，细胞增殖应用MTT比色法检测A490值。随着UⅡ干预浓度的增加,RFB吸光度值呈浓度依赖性增加，其中1×10-9和1×10-8两个浓度组

6、较对照组明显升高，且差异有统计学意义(P＜0.05，P＜0.01)，见表1。表1不同浓度UⅡ对肾间质成纤维细胞增殖的影响(略)2.3UⅡ对肾间质成纤维细胞周期的影响肾间质成纤维细胞经不同浓度UⅡ(10-7，10-8，10-9，10-10mol/L)刺激24h后，细胞周期应用流式细胞仪检测，在10-10～10-8mol/L的浓度范围内，随着UⅡ浓度的增加，S期细胞百分比逐渐增多。以10-8mol/LUⅡ的作用最明显，10-7mol/LUⅡ对细胞周期影响与对照组比较无统计学差异(见表2)。表2不同浓度UⅡ对肾

7、间质成纤维细胞周期的影响(略)3讨论UⅡ不仅具有缩血管效应，还是体内重要的促有丝分裂原，能够促进血管平滑肌细胞、心脏成纤维细胞和气道平滑肌细胞等多种细胞的增殖〔4〕，并且在猪肾小管上皮细胞系、肾上腺皮质癌细胞系及肾细胞癌细胞系也显示出UⅡ的促丝裂作用〔5〕。Tzanidis等〔6〕在新生大鼠离体心肌研究中发现，UⅡ呈剂量依赖促进心肌细胞纤维化，推测UⅡ在心肌肥大及纤维化过程中起调控作用。最近有研究发现，UⅡ对乳鼠肾小球系膜细胞具有诱导作用〔7〕，提示了UⅡ可能参与糖尿病肾病系膜细胞的增殖发病学。UⅡ及其受

8、体在肾脏有丰富表达〔8〕。在健康人肾脏UⅡ主要存在于肾小管和集合管上皮细胞，尤其是远曲小管。这些可能意味着UⅡ在肾脏功能调节中有重要作用。但目前在肾脏中的作用仍未阐明。肾间质纤维化是所有慢性肾脏疾病进行性发展的共同通路，是导致慢性肾衰竭的病理学基础，其发生机制较为复杂，可表现为肾间质成纤维细胞增殖、活化和表型转分化以及ECM过度积聚等〔9〕。本研究观察了UⅡ对肾间质成纤维细胞增殖、细胞周期影响。结果显示UⅡ可剂量依赖性的促进肾