尾加压素ⅱ促进晶状体上皮细胞增殖的实验研究

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1、尾加压素Ⅱ促进晶状体上皮细胞增殖的实验研究：黄秀榕，祁明信，李坤鹏，陈义【摘要】目的：探讨尾加压素Ⅱ(urotensinⅡ,UⅡ)对晶状体上皮细胞（lensepithelialcell,LEC）增殖的影响。方法：采用不同浓度的UⅡ与体外培养的LEC共同孵育后，用MTT法检测LEC的活性，并用3H胸腺嘧啶（3HTdR）掺入法检测LEC增殖。结果：109mol/LUⅡ组、108mol/LUⅡ组、107mol/LUⅡ组和106mol/LUⅡ组的吸光度值均显著高于对照组(P<0.05，P<0.05，P<0

2、.01，P<0.01)。1010mol/LUⅡ组、109mol/LUⅡ组、108mol/LUⅡ组、107mol/LUⅡ组和106mol/LUⅡ组的3H掺入放射活性均显著高于对照组(P<0.01)，分别是对照组的1.36倍、1.40倍、1.45倍、1.59倍和1.66倍。呈浓度依赖关系。结论：UⅡ具有促进LEC增殖的作用。【关键词】尾加压素Ⅱ；晶状体上皮细胞；增殖；后发性白内障AbstractAIM:TostudytheeffectofurotensinⅡ(UⅡ)，aneethylthiazolylte

3、trazolium(MTT).TheproliferationsofLECol/LUⅡ,108mol/LUⅡ,107mol/LUⅡand106mol/LUⅡol/L,109mol/LUⅡ,108mol/LUⅡ,107mol/LUⅡand106mol/LUⅡesrespectively,anner.CONCLUSION:UⅡcaninduceproliferationofLEC.KEYSO）系美国Amresco公司产品，DMEM培养基为美国GIBCO公司产品，2,5二苯基恶唑（PPO）及1,4双（5

4、苯基恶唑基2）苯（POPOP）为中国医药集团上海化学试剂公司产品。全自动酶标读数仪(购自美国BioTekELX808)。1.2方法1.2.1LEC活性的检测取第3代培养的LEC，台盼蓝染色，计算活细胞数并调整细胞密度至5×108个/L，在37℃，5%CO2培养箱中常规培养24h，使细胞同步化。将实验分成6组，每组8个样本。对照组在LEC内加入DMEM培养液，1010UⅡ组，109UⅡ组，108UⅡ组，107UⅡ组和106UⅡ组分别在对照组基础上加入终浓度为1010mol/L,109mol/L,108mol/L

5、,107mol/L和106mol/L的hUⅡ。置CO2培养箱中继续培养72h后，吸去培养液，每孔分别加入终浓度为0.5g/L的MTT100μL。CO2培养箱中继续放置4h后，加入DMSO溶液100μL，振荡10min后室温下静置5min，于全自动酶标仪上用490nm比色测定吸光度A值。1.2.2LEC增殖的检测取第3代培养的LEC并使细胞生长同步化。按照上述实验分组，分别加入不同浓度的hUⅡ，每组8个样本，CO2培养箱中继续培养12h后，吸去培养液，每孔分别加入3HTdR（其放射比活性为每孔3.7×104个/min），继续培养1

6、2h。吸去培养液，消化细胞并用真空泵抽滤，将细胞收集于玻璃纤维膜上。于60℃,30min条件下烘干滤膜，用液闪计数仪测定3H放射活性。统计学分析:用SPSS12.0统计软件分析。所有结果用均数±标准差（±s）来表示。各组与对照组间数据比较采用t检验，各组间数据比较采用单因素方差OneC)增殖，使G0期细胞进入细胞周期。UⅡ还能促进实验大鼠心肌成纤维细胞、气道平滑肌细胞、肾系膜细胞发生增殖，且在一定的浓度范围内其促增殖作用具有浓度依赖性[4]。另有研究表明，UⅡ可刺激离体培养的大鼠胸主动脉VSMC发生增殖、呈浓度依赖关系。且降钙素基因

7、相关肽、肾上腺髓质素、IL10等均能抑制由UⅡ诱导的VSMC增殖；UⅡ上调VSMC内皮素基因表达并促进VSMC内皮素的合成释放；肾上腺髓质素可浓度依赖性地抑制UⅡ刺激的VSMC内皮素mRNA水平的增加[46]。经广泛查阅国内外文献，有关UⅡ促进眼组织细胞增殖的研究尚未见报道，更未见UⅡ促进晶状体上皮细胞增殖的报道。本研究用不同浓度的UⅡ与体外培养的牛晶状体上皮细胞共同孵育，经MTT法检测发现UⅡ使LEC细胞活性显著增高；经3HTdR掺入法检测发现UⅡ能显著促进LEC发生增殖。且在一定的浓度范围内，随着UⅡ浓度增高，

8、其所促进的LEC活性增高越明显、促进LEC增殖越明显，即UⅡ促进LEC增殖呈明显的浓度依赖关系。检测细胞增殖这一重要生物学特性的指标有细胞计数法、MTT检测法、放射性核苷酸掺入法等。MTT法