用大鼠原代心肌细胞构建工程化心肌组织的研究

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1、用大鼠原代心肌细胞构建工程化心肌组织的研究作者：常海霞，郑强荪,刘兴光【摘要】目的探索用大鼠原代心肌细胞构建工程化心肌组织的方法。方法用胶原、Matrigel、2倍DMEM分别与含0.04%EDTA的0.25%胰酶制备的乳鼠原代心肌细胞（实验组）和0.1%胰酶制备的原代心肌细胞（对照组）混合，注入环形槽内形成心肌条带，一周后行力学拉伸继续培养一周。常规HE染色等对组织工程化心肌组织，即心肌条带进行评价。结果心肌条带出现自发性跳动，HE染色显示与正常成年大鼠心肌组织类似，电镜结果显示条带中的心肌细胞含有丰富的肌原纤维,肌小节结构和Z带清晰

2、可见。用含0.04%EDTA的0.25%胰酶制备的原代乳鼠心肌细胞构建的心肌条带，拉伸后第4天形成一致性跳动。免疫组化检测提示肌钙蛋白阳性细胞数多于对照组。电镜观察显示，条带的心肌细胞中肌原纤维较对照组明显增多。结论这一方法可构建工程化心肌组织，心肌细胞制备方法的改进以及液态Ⅰ型胶原浓度的精确测定，可显著提高构建心肌条带的成功率及条带的生理功能，使其更接近正常心肌组织。【关键词】原代心肌细胞;液态Ⅰ型胶原;工程化心肌组织基金项目：全军医学科研“十五”计划项目自主（No.01MB126）　　ExperimentalStudyofEngin

3、eeredHeartTissueUsingNeonatalRatPrimaryCardiomyocytes　　Abstract:OBJECTIVEToconstructengineeredhearttissue(EHT)usingneonatalratprimarycardiomyocytes.METHODSLiquidcollagentypeI,Matrigeland2×DMEMixedyocytesisolatedusing0.25%trypsinincluding0.04%EDTA,or0.1%trypsinonlyasacont

4、rol.Themixtureoldstoconstructcardiacring.7dayslater,thecardiacringicroscopyandtransmissionelectronmicroscopy,routineHEstainingandimmunohistochemicalstainingyocytesbledthatofthenativeadultcardiactissueinmorphology.Transmissionelectronmicroscopyrevealedthatthecardiacmyocyt

5、esyofibrils,clearlydefinedsareresandZlines.TheEHTsconstructedusingthecardiacmyocytesisolatedby0.25%trypsinsupplementedetosynchronousbeatingatthefourthdayofstretching.Histologicalandimmunohistochemicalanalysisalsoshoorepositivecardiacmyocytesandmoremyofibrilspercellthanin

6、thecontrolgroup.CONCLUSIONThemethoddescribedinthisstudyishelpfulinconstructingtissueengineeredhearttissue.TheimprovedtechniqueforcardiacmyocyteisolationandaccuratequantificationofliquidcollagentypeIarebeneficialtoEHTsconstructionandtheEHTsarelikelytosharemorestructuralan

7、dfunctionalsimilaritiesilartothenativehearttissue.　　Keyarycardiacmyocyte;LiquidcollagentypeI;Engineeredhearttissue(EHT)　　本实验旨在对在体外构建和重现心脏组织的方法进行探索，寻找能够构建类似正常心肌组织的方法，这一方法2002年德国的科学家Zimmermann等人的研究中首次使用［1-3］，军事医学科学院赵云山等对其进行了改进［4］，在此基础上我们对构建的方法做了进一步改进，并对影响因素进行了总结，对所涉及的传统方法做

8、了改良和细化。　　1材料与方法　　1.1材料　　1.1.1试剂　　DMEM(美国Sigma公司),胎牛血清(北京元亨圣马生物技术研究所),胰酶(美国Sigma公司),基质蛋白(Matrigel,美国Sigm