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1、新生大鼠心肌细胞的原代培养的论文【摘要】目的：探讨新生大鼠心肌细胞的分离和培养方法。方法：应用0.0625%的胰蛋白酶重复消化出生第2d乳鼠的心肌组织多次,收集的细胞用含10%胎牛血清的dmem培养基中和，用差速贴壁分离法分离，在以溴脱氧尿嘧啶（brdu）纯化心肌细胞后置co2培养箱孵育7d。结果：分离1只乳鼠获得的心肌细胞产量约为140万个，且有活力心肌细胞占90％以上；培养4～6h的乳鼠心肌细胞开始贴壁生长,12～24h明显增殖,3～4d后细胞融合成片；心肌细胞由圆形变为梭形、星形、多角形,并出现自发性节律性搏动。结论：本研究应用的心肌细胞原代培养方法可获得高产量、高活力的心肌细胞，是一种
2、可靠的心肌细胞培养方法。【关键词】心肌；细胞培养技术；大鼠primarycultureofneonaterattuscardiocyte/mafang
3、fang，shenxiao
4、li，linli
5、fang，hanli
6、li//chinesejournalofcardiovascularrehabilitationmedicine,2009，18（2）:125abstract：objective:toexploretheprimaryculturesmethodofneonatalratcardiomyocytes.methods:cardiacmuscleoftemmedium,.myoca
7、rdialcellsinandillioncardiocytescanbeobtainedfromoneratandthevitalcellandpolygonshapeinthevisualfieldofinvertedmicroscope.allcellsstretchedoutparapodiumandbeatedspontaneouslyandrhythmically.conclusion:agreatquantityandhighsurvivalratecardiocytescanbeeffectivelyandquicklyculturedbythismethod.author′s
8、 address：fujianprovincialhospital，fujianmedicaluniversity，fuzhou,fujian,350001，chinakeyyocardium;cellculturetechniques;rat自1960年haracy等[1]首次对乳鼠的心肌细胞进行培养以来，国内、外许多学者对心肌细胞原代培养方法进行了研究。.体外培养的心肌细胞能够保持其在体内原有的许多结构和功能，同时排除了神经、体液等因素的干扰，因此体外培养在心肌细胞的生长、发育、生理、代谢、病理等研究中具有重要意义。然而心肌细胞在分离过程中易受损伤,活细胞也很少分裂，且不易传代,因此提高心
9、肌细胞产量和活力是许多学者研究的目的。本实验参照simpsonp等[2]心肌细胞的培养方法并作了改进，探讨了乳鼠心肌细胞培养的方法，对心肌细胞形态、搏动状况进行观察，并对其纯度进行了鉴定，从而获得高产量、高活力的心肌细胞。1资料与方法1.1材料实验动物：选择出生第2d的sd乳鼠,雌雄不拘（由福建省医学科学研究所实验动物中心提供）。主要仪器与试剂:二氧化碳培养箱，olympus倒置显微镜,超净工作台，低速自动平衡离心机,恒温磁力搅拌器;dmem培养基(hyclonc公司)、胎牛血清(hyclonc公司)、胰蛋白酶(gibco公司)、d-hank′s液(hyclonc公司)、溴脱氧尿核苷(brdu
10、，sigma公司)、小鼠抗大鼠sarerieactin单抗(博士德公司)；山羊抗小鼠igg(博士德公司)。1.2方法1.2.1心肌细胞的分离:取第2d的sd乳鼠，无菌条件下开胸取心尖部，用预冷的d-hank′s液洗涤3遍，将心脏剪成约1mm3大小；用0.0625％的胰酶在37℃恒温磁力搅拌器中消化心肌组织，消化过程中采用分次消化时间(5min×5次,6min×5次,7min×5次,8min×5次)，第一次消化后自然沉淀并弃上清，以后自然沉淀后取上清；每次分离的上清液加等量含10％胎牛血清的dmem培养液轻轻吹打制成细胞悬液，1000r/min离心10min，重复3次。1.2.2心肌细胞的培养:
11、细胞悬液放co2培养箱培养90min后，采用差速贴壁分离技术,吸收培养瓶中的细胞悬液，调整细胞浓度为5.0×105细胞/ml，将单细胞悬液接种于培养板中，前3d滴入brdu使其终浓度为0.1mmol/l，并继续培养；24h后换液,以后隔日换液。1.2.3心肌细胞搏动率的观察:在倒置显微镜下观察第1d至第7d心肌细胞的生长状态、形态变化，并摄像记录自发搏动频率。随机计数培养至第4d的心肌细胞的搏动率
