新生大鼠成骨细胞原代培养与鉴定

新生大鼠成骨细胞原代培养与鉴定

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1、中国组织工程研究第17卷第41期2013–10–08出版ChineseJournalofTissueEngineeringResearchOctober8,2013Vol.17,No.41www.CRTER.orgdoi:10.3969/j.issn.2095-4344.2013.41.003[http://www.crter.org]程浩,张延芳,许巍.新生大鼠成骨细胞原代培养与鉴定[J].中国组织工程研究,2013,17(41):7199-7204.新生大鼠成骨细胞原代培养与鉴定★11212程浩,张延芳,许巍(广东医学院信息

2、工程学院物理教研室,广东省东莞市523808;广西梧州制药(集团)股份有限公司,广西壮族自治区梧州市543002)文章亮点:1实验的特点在于采取3种方法即胶原酶消化法、分段胶原酶消化法及组织块法,从大鼠幼鼠颅骨中分程浩★,男,1986年生,离成骨细胞,区别于传统的一种或者两种方法。能更全面的确定胶原酶消化法是一种方便、高效、理想的原山东省临沂市人,汉族,代成骨细胞分离培养方法。2013年广东医学院毕业,硕士,主要从事骨质疏松2实验所用骨细胞分离部位为大鼠的颅骨,相对骨膜以及骨髓,颅骨面积较大且操作简单。现在成骨细方面的研究。胞原

3、代培养方法众多,实验探索一种操作简便,既经济又高效的原代培养成骨细胞的方法,为进一步的实验chenghao712@163.com研究奠定基础。关键词:通讯作者:张延芳,博士,组织构建;骨组织构建;成骨细胞;原代培养;胶原酶消化法;组织块法;胶原酶;成骨细胞鉴定副教授,广东医学院信息主题词:工程学院物理教研室,广大鼠;颅骨;成骨细胞;细胞培养技术;细胞增殖;生长曲线表东省广州市523808zjzyf2006@163.com基金资助:东莞市医疗卫生重点课题(2012105102006)*;东莞市医疗卫生一般课题(2012105152

4、00001)*中图分类号:R318文献标识码:A摘要文章编号:2095-4344背景:组织工程需要大量的种子细胞,成骨细胞是骨组织工程的重要种子细胞之一。但是成骨细胞培养难度(2013)41-07199-06大,不同培养方法得到的成骨细胞数量、纯度、增殖及分化活性各有区别。收稿日期:2013-04-05目的:验证及比较成骨细胞原代培养常用的3种方法,探索一种操作简便,既经济又高效的原代培养成骨细修回日期:2013-07-16胞的方法,为进一步的实验研究奠定基础。(201305122/D·C)方法:取新出生72h内SD大鼠乳鼠颅骨

5、,以胶原酶消化法、分段胶原酶消化法及组织块法分离成骨细胞,进行细胞形态观察、细胞化学染色、CCK-8法绘制生长曲线及锥虫蓝排斥法计数活细胞率。结果与结论:分离培养的成骨细胞增殖良好,具备典型成骨细胞特性,细胞化学染色结果明显。胶原酶消化法比分段胶原酶消化法提取的成骨细胞数量多,细胞存活率高(P<0.05);且比分段胶原酶消化法操作简单,耗时短。组织块法操作最为简单,对细胞损伤较小,但是细胞数量低、耗时长,很难用于大规模成骨细胞培养。胶原酶消化法是一种方便、高效、理想的原代成骨细胞分离培养方法。Primarycultureandi

6、dentificationofneonatalratosteoblasts1121ChengHao,ZhangYan-fang,XuWei(DepartmentofPhysics,SchoolofInformationEngineering,2GuangdongMedicalCollege,Guangzhou523808,GuangdongProvince,China;GuangxiWuzhouPharmaceutical(Group)Co.,Ltd.,Wuzhou543002,GuangxiZhuangAutonomousRe

7、gion,China)AbstractChengHao★,Master,BACKGROUND:Tissueengineeringrequiresalotofseedcells.OsteoblastshavebecomeimportantseedcellsDepartmentofPhysics,SchoolofInformationEngineering,inbonetissueengineering.However,itisdifficulttoculturetheosteoblasts,andcellnumber,purity

8、,proliferationGuangdongMedicalCollege,anddifferentiationactivityaredifferentobtainedbydifferentculturemethods.Guangzhou523808,OBJEC

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