资源描述：
《新生大鼠成纤维细胞原代培养》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第37卷第4期南华大学学报·医学版2009年7月Vol.37No.4JournalofUniversityofSouthChina(MedicalEdition)Jul.2009·基础研究·新生大鼠成纤维细胞原代培养刘方,龙治峰,龙双涟(南华大学医学院组织胚胎学教研室,湖南衡阳421001)摘要:目的探讨新生SD大鼠成纤维细胞的培养方法。方法采用胰酶消化法和组织块贴壁法原代培养成纤维细胞。采用HE染色及波形蛋白(Vimentin)免疫细胞化学染色对培养细胞进行鉴定。结果两种方法均能培养出成纤维细胞,其中酶消化法一次性可获得较多细胞,但细胞
2、状态较差,贴壁慢,生长慢;组织块贴壁法短时间内可长出大量成纤维细胞,一周即可传代。HE染色后倒置相差显微镜下观察细胞形态典型,免疫细胞化学染色结果显示Vimentin呈阳性反应。结论组织块贴壁培养法是获取成纤维细胞简单,可行,快速的方法。关键词:SD大鼠;成纤维细胞;原代培养中图分类号:R329.1文献标识码:A文章编号:1672-7444(2009)04-0379-03PrimaryCultureFibroblastofNewbornRatsLIUFang,LONGZhi-feng,LONGShuang-lian(Departmento
3、fHistologyandEmbryology,UniversityofSouthChina,Hengyang,Hunan421001,China)Abstract:ObjectiveTostudythemethodtoculturefibroblastofnewbornrats.MethodsTheprimaryfibro2blastswereculturedbythemethodoftrypsindigestionandtissueadherentrespectively.Hematoxylineosinstainingandvi2m
4、entinimmunoh-istochemicalstainingwereusedtoidentifyfibroblast.ResultsTheprimaryfibroblastcanbecul2turedbybothtwomethods.Morefibroblastswereobtainedbytrypsindigestionthantissueadherent,butwithpoorcellstateandslowadherentandgrowth.Alargenumberoffibroblastscanbegrownusingmet
5、hodoftissueadherentinashortperiodoftime,aweeklater,cellscanbesubcultured.ThepassagedcellsweretypaclfibroblastmorphousunderinvertedphasecontrastmicroscopeandshowedimmunocytochemicalstainingpositivelyforVimentin.ConclusionsAdherenttissuecultureisasimple,feasibleandrapidmeth
6、odtoobtainfibroblasts.Keywords:SpragueDawleyrats;fibroblasts;primaryculture成纤维细胞是结缔组织中主要的细胞类型,能养方法,从而为基因转染、细胞移植等提供材料。合成和分泌胶原蛋白和弹性蛋白,生成胶原纤维、弹性纤维与网状纤维等细胞外基质成分、另外还能分1材料与方法泌少量成纤维细胞生长因子(FGF)等细胞因子。成纤维细胞由于取材方便、容易培养、且容易受基因修1.1动物饰,所以经常做为基因修饰的受体细胞而用于蛋白新生SD大鼠1只,雌雄不限(南华大学动物部表达、细胞移植等工
7、作;另外由于成纤维细胞分泌的提供)。细胞因子能维持干细胞的未分化状态,所以也用来1.2主要仪器及试剂做为胚胎干细胞(ES),神经干细胞(NSC)等培养的[1,2]CO2培养箱,倒置显微镜,离心机,磷酸缓冲液饲养层。本实验旨在探讨可靠的成纤维细胞培收稿日期:2009-04-22通讯作者:龙双涟,硕士,教授,硕士生导师,E-mail:longshuanglian@yahoo.com.cn.379(PBS,自配),生理盐水(自配),D-Hanks液(自观察),然后用依红染色15min,再分别经80%、配),高糖杜氏改良培养基(DMEM,Soba
8、rlio),新生95%、100%乙醇脱水1min,二甲苯透明后用中性树牛血清(CBS,民海),0.25%胰蛋白酶+0.04%乙二胶封片。(2)免疫细胞化学染色种板及固定同HE胺四乙酸(EDTA
