酶免疫分析法检测肝肾胰岛细胞移植患者术后csa浓度的临床评价

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1、酶免疫分析法检测肝肾胰岛细胞移植患者术后CSA浓度的临床评价作者：温冬梅，梁剑平，吴剑杨，庞嘉琳，李曼【关键词】酶免疫分析法；移植；环孢霉素药物浓度　　［摘要］目的：评价用酶免疫分析法检测环孢霉素药物浓度进行药物浓度监测(TDM)的可靠性，测器官移植患者全血中环孢霉素的药物浓度，确保实体器官移植受体得到最有效的免疫治疗。方法：根据美国国家试验室标准委员会(NCCLS)EP5A、EP9A文件要求进行方法精密度、准确度、线性、回收率、携带污染率的评价试验，并对我院7例肝移植患者、21例肾移植患者、3例胰岛细胞移植患者进行342次全血环孢霉素药物浓度测定。结果：

2、该方法的批内和批间平均变异系数分别为1.815％和2.935％，线性回归方程为其平均回收率为98.8％，Y=1.019　3X-0.195　6，r=0.999　9，样本携带污染率低，肝肾移植患者术后应用三联免疫抑制疗法，环孢霉素药物浓度平均浓度为265ng／ml，患者无排斥反应和药物中毒反应。结论：酶免疫分析法测定环孢霉素药物浓度具有快速、准确、灵敏度高、操作简便、适于批量测定等优点，适合于医院器官移植患者术后的临床药物浓度监测，可广泛推广使用。　　［关键词］　酶免疫分析法；移植；环孢霉素药物浓度　　环孢霉素A(CSA)是真菌源性环状十一氨基酸多肽，是一种作

3、用很强而选择性很高的免疫抑制剂［1］，临床上主要用于器官移植以及免疫发病机制介导疾病的治疗，为目前公认的抗器官移植排斥反应最为有效的药物。监测患者全血中环孢霉素的药物浓度，并联合患者的临床情况和其他实验室数据后对其进行解释，从而确保实体器官移植受体得到最有效的免疫治疗和降低药物毒性是至关重要的，可以有效地维护患者的最佳免疫抑制水平。我科于2004年7月至2006年4月采用酶免疫分析法对我院7例肝移植患者、21例肾移植患者、3例胰岛细胞移植患者进行342次全血环孢霉素药物浓度测定，以评价该方法的实用性和探讨其临床价值，现报告如下。　　1　材料及方法　　1.1

4、　仪器　DADEDimenionRXL全自动生化分析仪。　　1.2　试剂　杜邦原装配套Flex试剂船，含底物稀释液、前处理试剂和β牛乳糖CSA酶标记抗体、固定于二氧化铬颗粒上的CSA、CPRG底物和用于水解的药片、酶标记抗体等试剂。　　1.3　方法和结果　　1.3.1　测定原理　采用免疫分析技术，通过磁性颗粒分离出游离和与CSA结合的酶抗体样品，测定时使用的Flex试剂船，系统自动混合并溶解全血样品，再与酶标抗体试剂混合，样品中存在的CSA与酶标抗CSA抗体试剂结合，将包被有CSA的磁粉颗粒填加到结合与游离的抗体酶标结合物溶液中，然后通过磁作用将反应混合物

5、分离。分离后，含有CSA抗体酶复合物的悬浮液被转移致电其他比色杯中，与底物β牛乳糖混合后，催化CRPG水解成CPR，在577nm处有最大的吸收峰，由于CPR的形成而产生的577nm处吸光度的变化与患者样品中的CSA含量呈比例，可以采用双波长577nm，700nm速率技术进行测定。　　1.3.2　样品的收集和保存　按照常规的步骤采集EDTA抗凝全血样品，在2℃～8℃下保存可以储存7d,样品置于-20℃条件下冷冻可长期储存。　　1.3.3　样本携带污染率测定　参照ICSH推荐的方法［2］，将高值标本连续测定3次，接着连续测定低值标本3次，携带污染率计算公式为(

6、L1L3)／(H1L3)×100％，其中L1、L3分别为低值第1次和第3次测定值，H3为高值第3次测定值，检测CSA的携带污染率为0.22％＜1％，接近于0.00，说明仪器具有良好的冲洗功能，交叉污染率低。结果见表1。　　表1　样本携带污染率（略）　　1.3.4　准确度评价试验　准确度评价试验［3］根据美国国家试验室标准委员会(NCCLS)EP9A文件要求，做方法学比较试验。每天收集8份标本，分别用酶免疫分析法和HPLC(高效液相色谱法)测定，连续测定5d，共计80份标本，以酶免疫分析法测定结果为Y轴，对比方法高效液相色谱法为X轴，进行回归分析和卡方检验。

7、该方法与高效液相色谱法进行方法学比较，两法差异无显著性(P>0.05)，直线回归方程为：Y=1.071X+0.0613，r=0.978，提示两法相关性良好，符合临床实验要求。　　1.3.5　线性评价［3］　从本院肾移植术后患者中收集高CSA的全血，混合后为高值标本，用生理盐水做5个浓度的稀释，在本仪器上检测作得的检测值为实测值，根据稀释浓度可以计算出5个样本的CSA浓度为预期值。以预期值作横坐标，实测值作纵坐标，做直线回归分析，观察其线性。检测限和线性关系：相关方程Y=1.0193X-0.1956，r=0.999　9，其中b=1.0193，a=-0.

8、1956，b接近1，a接近0，r>0.95，符合临床试验要求