快速斑点免疫渗滤试验诊断日本血吸虫病的初步研究

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1、快速斑点免疫渗滤试验诊断日本血吸虫病的初步研究作者：傅行礼1，姜旭淦1，仇锦波1，陈盛霞1，徐会娟1，帅连云1，曹建平【摘要】目的探讨快速斑点免疫渗滤试验（FDIFA）诊断日本血吸虫病的实用价值，寻找适用于该实验的最佳诊断抗原。方法(1)分别制备日本血吸虫雌、雄成虫及虫卵粗抗原与组分抗原，并预制成抗原片。(2)采用FDIFA和常规ELISA法分别检测血吸虫病患者血清33份，健康人血清32份，肝吸虫病、肺吸虫病及猪囊虫病患者血清各5份，比较了日本血吸虫雌、雄虫及虫卵抗原的敏感性和特异性。(3)以χ2

2、检验作统计学处理和分析。结果日本血吸虫雌、雄成虫及虫卵的组分抗原用于FDIFA，其敏感性好于粗抗原，且特异性亦较好；同时，雄虫抗原好于雌虫抗原，虫卵抗原好于成虫抗原，但它们之间并差异无显著性（P＞0.05）。结论日本血吸虫卵组分抗原用于FDIFA诊断日本血吸虫病，具有较好的敏感性和特异性；但抗原分离、纯化方法及实验过程仍需进一步优化。【关键词】日本血吸虫；快速斑点免疫渗滤试验(FDIFA)；ELISA；组分抗原【Abstract】ObjectiveToexplorediagnosticeffect

3、ofschistosomiasisjaponicumbyfast-dot-immunofiltrationassay(FDIFA)andlookforoptimalantigenstodiagnosethisdisease.MethodsTheroughandfractionalantigensofmaleandfemaleandeggofSchistosomajaponicumsof33schistosomiasisand32healthycontrolsandotherparasitoses(

4、15cases).paredthesensitivityandspecificityoftheseantigens.ResultsAllfractionalantigenshavegoodsensitivityandspecificity.ConclusionFractionalantigensofeggofSchistosomajaponicummaybeappliedtodiagnosisofschistosomiasis.FDIFAethodfordiagnosisofschistosomi

5、asis.【Keyajaponicum；FDIFA；ELISA；fractionalangtigens；ELISA日本血吸虫病（以下简称血吸虫病）分布广泛，危害严重。近年来由于受多种因素影响，我国江湖洲滩地区有螺面积时有增加，人群感染血吸虫人数明显增多，疫情仍呈上升趋势。传统的病原学方法和常规免疫诊断技术在诊断病人、监测疫情和大规模流行病学调查方面难以适应血防工作的需要。因此，研制简便、快速、准确、价廉，便于在疫区推广应用、具有普查、临床实验诊断和疗效考核价值的检测方法是当前搞好血防工作的前提条件

6、之一。常规ELISA法自20世纪70年代开始应用于血吸虫病诊断，具有较好的敏感性和特异性。但因操作步骤多，实验时间长，且需要一定的设备，故较难在基层和现场推广使用。为了提高ELISA检测速度，更便于基层及现场调查时使用，笔者根据ELISA的实验原理和本室在测姜片虫病时的免疫学方法［1］，稍加改进，建立了快速斑点免疫渗滤试验(Fast-dot-immunofiltrationassay，FDIFA)，应用于血吸虫病的实验诊断，并与常规ELISA法作比较，取得了初步效果。现报告如下。1材料与方法1.1

7、血清来源(1)33份血吸虫病患者（均粪便孵化阳性）血清均由湖南省血吸虫病防治研究所提供。(2)32份健康人血清采自本校2004年入学体检的非疫区新生。(3)肝吸虫病、肺吸虫病及猪囊虫病患者血清各5份，均由中国疾病预防控制中心寄生病预防控制所提供。所有血清均置-20℃保存备用。1.2主要试剂1.2.1硝酸纤维素膜（NC，孔径0.25μm），为SchlEicherSchuell产品。1.2.2辣根过氧化物酶(HRP)标记的金黄色葡萄球菌A蛋白（HRP-ProtEInA；HRP-SPA）由美国进口，工作

8、浓度为1：10000。1.2.3四甲基联苯胺（TMB.2HCL）为Sino-AmericanBiotechnologyCo产品，由上海华美生物工程公司供应。临用前1h配制：先将5mgTMB.2HCL加入1ml二甲亚砜(DMS)液中溶解，然后加入50ml0.05MpH5.0柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，再加入25μl30%H2O2，混匀。1.2.4封闭液为含1%BSA的pH7.0PBS-Tin；再置冰浴中超声粉碎，频率1500Hz，每次3min，间歇1min，共5次。然后置冰箱冷冻室，反复