斑点免疫金渗滤法检测猪细小病毒的研究

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1、西南农业大学硕士学位论文斑点免疫金渗滤法检测猪细小病毒的研究姓名：付庆申请学位级别：硕士专业：临床兽医学指导教师：蔡家利2003.5.1摘要7l≮采用同步接种的方式，在PK．15细胞上增殖PPV，并用离心、PEG．6000沉淀法纯化、浓缩了PPV细胞培养液近52倍，测得病毒蛋白的含量为1．5mg／ml，以1：2．5的比例加入白油佐剂制各出免疫原，采用注射剂量递增的方式免疫家兔，五免后获得高免血清，经琼扩试验检测抗体水平在1：64以上，使用盐析、凝胶过柱、透析等方法提取IgG，测其蛋白含量为9．69mg／ml。用柠檬酸三钠还原法制备出

2、了金颗粒直径为18～20nm的胶体金，标记提纯的兔抗PPVIgG后，初步建立了一种以NC膜为固相载体，以红色胶体金为标记物的检测PPV的斑点免疫金渗滤法(DIGFA)，并确立了最佳试验条件：该法对纯化PPV的最小检测量为5．86ng／点，其敏感性为HA试验的100倍，特异性试验表明DIGFA不与PRV、PRRSV、PK一15细胞液、猪瘟组织以及正常猪的肝、肾组织发生交叉反应。。／“’关键词：猪塑型堂：<(PPVy『免疫胶体金；诊断；猪pr磊”；=ir绶一／—一一一二⋯一二L』一一StudyonaDotImmuno—goldFiltr

3、ationAssayfortheDetectionofPorcineParvovirusAntigenFuQing(AnimalScienceandTechnologyDepartmentofSouthwestAgriculturalUniversity,ChongQin9400716)ABSTARCTPorcineparvovirus(PPV)wasproliferatedonPK-15cellbythewayofsynchronousinoclation，thenculturedPPVwerepurifiedandconcent

4、ratedwithcontrifuationandPEG一6000，thevolumeofwhichⅥasdecreasedbyfifty-twotimesandthecontentofvirusproteinwas15mg／m1．AftertheoilemulsionantigenpreparedwiththepurifiedandconcentratedPPVinoculatedintotherabbitsforseveraltimes，thehi【曲immunseserawereobtained，IgGfromrabbitan

5、ti-PPVserumwasextractedbysaltingout，gelfiltration，dialysisandsoon．Thepurifiedrabbitanti-PPV垮Gwaslabelled、Ⅳiththepreparedcolloidalgold．Dot·immunogoldfiltrationassay(DIGFA)withtheNitrocelluloseMembranesaScarrierandtheredcolloidalgoldaslabelwaselementarilydevelopedfordete

6、ctionofPPVandtheoptimumworkingconditionsweredetermined．TheminimumamountofPPVantigendetectedbytheDIGFAwas5．86ngperdot．whichwas100一foldassensitiveasthehaemagglutination(HAltest．SpecificassayshowedthatDIGFAdidn’thappenedcross—reaction嘶也PRRSV，PRV,PK一15cellculturemedia，HCVt

7、issue。naturelporcineliverandkidey．Keywords：Porcineparvovirus；Immuno—gold；Diagnosis；Pig2文献综述猪细小病毒病研究进展猪细小病毒病(Porcineparvovirusdisease)是由猪细小病毒(Porcineparvovirus，PPV)目i起的一种猪的繁殖障碍病，主要表现为怀孕母猪发生流产、死产、胚胎死亡和胎儿木乃伊化，而母猪通常无明显临床症状。从病原的发现至今已有三十多年的历史，该病已遍布世界各地，给世界生猪生产带来了巨大损失。在美国衣阿华州

8、曾统计每年由PPV引起的繁殖损失高达4500万美元，而在前苏联因此病使母猪产仔力下降了50～60％口1，各国学者也由此展开了许多研究，从病原学，到疫苗的研制，各种诊断方法的建立以及分子结构的阐明等，现将情况综述如下：1．PPV的发生历