猪细小病毒弱毒苗的免疫原性及猪体载量研究

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1、StudiesonImmunogenicityofPorcineParvovirusAliveVaccineandTissueLoadDistributionsinPigsThesi：submittedt011eslssUDmlttel：1toQ箩ngdaoAgriculturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeof—MasterofAgronomy，一一WangXiaoling(DepartmentofAnimalScienceandVeterinaryMedicine)Superviso

2、r：Prof．BiKedongProf．CuiShangjinQingdao．ChinaJune，2012独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得青岛农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：主凇时间：ag-．oo_@6月国日关于论文使用授权的说明本人完全了解青岛农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留

3、送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意青岛农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签名：互茹淞时间：^，>年占月邃日导师签名：听≥巨．f帅‰旺钆1日一I删嬲监猪细小病毒弱毒苗的免疫原性及猪体载量研究摘要本研究主要评价研制的猪细小病毒弱毒苗的免疫原性及在猪体的组织分布。选择PPV．BQ连续传代致弱的毒株免疫接种后备母猪和仔猪，试验选PPV阴性的11月龄母猪和30-40日龄的仔猪，随机分为2组，即健康对照组和免疫接种组。免疫组

4、于第0d肌肉注射接种PPV．BQ弱毒株(TCID50=104．5／mL)的10倍稀释液10mL，健康对照纽接种DMEM细胞培养液10mL。在o、7、14、21、28、35、42d采集血液并分离血清，．20℃保存。分别在试验第7、21、42d处死仔猪，母猪于免疫接种后第10d配种，于免疫后第35d处死，收集主要脏器，．20℃保存。血凝抑制、ELISA、病毒中和抗体试验检测抗体的变化水平；WST-8方法检测脾淋巴细胞增殖情况；PCR检测前21d的病毒血症情况；血凝试验检测脏器的病毒分布情况。主要脏器制成病理切片HE染色，观察猪体的组织病理学变化．根据PPV-VP2

5、基因设计了一对特异性引物，建立了检测PPV的实时荧光定量PCR方法，对该毒株在后备母猪和仔猪的体内组织的病毒载量进行测定。结果如下：1．临床症状及剖检结果显示，对照组无临床症状和病理变化，免疫组母猪和仔猪无临床症状和无可见的病理损伤。2．抗体变化水平显示，对照组抗体水平一直处于阴性状态，母猪在免疫后7d产生保护，炷抗体，一直持续到试验结束；免疫组仔猪抗体水平较低，没有达到保护性抗体水平。淋巴细胞增殖试验结果显示，病毒性刺激可使免疫组猪体脾淋巴细胞增殖水平显著提高，对照组淋巴细胞在特异性刺激时不能产生明显增殖。3．组织免疫形态学检测结果显示，对照组母猪和仔猪各脏

6、器均未发现明显的免疫形态学损伤；免疫组母猪和仔猪的子宫未发现明显的免疫形态学损伤，其它组织有轻微损伤。4．病毒组织分布结果显示，对照组母猪及仔猪脏器中均未检出PPV病毒。免疫组母猪心脏和子宫中检出PPV病毒，免疫组仔猪在心脏、脾脏和肾脏中检出了PPV病毒。本试验探讨了PPV．BQ弱毒株接种后备母猪及仔猪的免疫原性，为猪细小病毒病弱毒株的后续研究奠定了基础。关键词：猪细小病毒弱毒株；免疫原性；组织免疫形态学；病毒组织分布StudiesonImmunogenicityofPorcineParvovirusAliveVaccineandTissueLoadDistr

7、ibutionsinPigsAbstractGiltsandpigletswereinoculatedwithPPV-BQattenuatedstraininthisstudytoevaluatetheitsimmunogenicityanddistributionintissues．Threegiltsandsixpigletswererandomlydividedintotwogroups．Theimmunizationgroupandthecontrolgroupwerehousedinindividualisolationrooms．Theimmuni

8、zationgroupwereinoc