[精品]猪细小病毒检测方法的研究进展时间

《[精品]猪细小病毒检测方法的研究进展时间》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、猪细小病毒检测方法的研究进展时间作者:赵玮，杨俊猪细小病痔(PPV)是以引起胚胎和胎儿感染及死广而母体本身不显症状的一种猪繁殖障碍性传染猪细小病壽(PPV)是以引起胚胎和胎儿感染及死亡而母体本身不显症状的一种猪繁殖障碍性传染病。临床主要表现为胎儿感染死亡，产出死胎、畸形胎、木〃伊胎及不孕等症状.还可致皮炎和腹泻。PPV与2型圆环病^(Porcinecircovirustype2,PCV2)协同感染是导致断奶仔猪多系统衰竭综合症(Porcinepostweaingmulisystemicwasting

2、syndrome,PMWS)的主要原因之一。近年来，随着我国规模化养猪业的发展和品种的引进.PPV感染呈扩人上升的趋势.给养猪业带来了巨大的经济损火。经初步调查，我国猪群中PPV血清阳性率高达92%左右。因此.为了保障我国养猪业的健康发展.加强对本病的检测具有十分重大的实际意义。冃前，国内外已建立许多检测猪细小病毒的方法，主要冇血凝和血凝抑制试验、荧光抗体技术、放射免疫测定、免疫微球试验、酶联免疫吸附试验、银加强胶体金技术、单克隆抗体技术、核酸探针检测技术以及多聚酶链式反应等。本文就该病检测方法的研

3、究进展做一综述。-般情况下，如果一个猪场在同一时间内仅妊娠母猪发生流产、死胎、木乃伊胎，其他猪无明显症状，同时有证据证明是-•种传染病时，应该怀疑是PPV感染，并做进一步检测。1、病毒学检杏1.1病毒的分离・鉴定1.1.1病料的釆集和分离70FI龄以内流产胎儿、死胎、木乃伊胎及弱仔的脑、肾、睾丸、肠系膜淋巴结或母猪的胎盘和阴道分泌物均可作为分离病毒的材料.以肠系膜淋巴结和肝赃分离率最高。病料加双抗处理，研髀至乳状，4°C冰箱过夜，3000r/min离心lOmin,取上清液・20°C保存备用。准备猪肾

4、原代或继代细胞，待细胞牛长铺满至细胞瓶的1/3时，倾倒瓶内营养液.加入己处理好的病料上清ImL,37°C吸附1小时，期间每隔15min摇一次，加入无血清的维持液，继续培养3〜6天，每天观察，直至细胞出现病变。未出现病变者，盲传3代.仍没冇病变弃Z。若有PPV存在，培养16〜36小吋的细胞核内可观察到包涵体.3・6天出现特征性细胞病变。病毒分离成功的关键在于是否同步接种，这是因为病毒主要在有丝分裂的S期细胞内复制,即同步接种后16〜48小时。也有人强调在种植细胞的4小时内必须将含病毒的样品加入到培养瓶

5、中，否则病毒增殖不理想。1.1.2病毒鉴定①电镜观察将出现明就病变的细胞经胰酶消化后，经离心、洗涤处理，包埋成小块用饿酸固定，经脱水、浸透及酣酸铀和柠檬酸铅正性染色后电镜检查。在细胞核内可见大量的病毒粒了，呈圆形,无囊膜，大小约20nmo②血凝及血•凝抑制试验血凝试验:将岀现病变的细胞培养物反复冻融3次,2000r/min离心lOmin,除去细胞碎片.在96微孔板上按1：22、1：23、...1：2n倍比稀释每孔加入50pL,再加入50yL的0.5%豚鼠红细胞混匀，4°C作用1〜2小时判定结果，以5

6、0%的红细胞能发生凝集判为终点，样品出现凝集终点的最高稀释度定为HA滴度。血凝抑制试验：将血清在96微孔板上按1：22.1：23.…1：2n的比例倍比稀释，每孔加入50)11,再加入50卩14单位的抗原混匀作用30min后加入50pL的0.5%豚鼠红细胞，4°C作用1〜2小时判定结果.以能完全抑制红细胞凝集的血清最高稀释度定为HI效价。该试验较为简单.易操作，是基层兽医检测PPV较为经典的方法。①间接免疫荧光法病毒分离不适合作常规的诊断方法，因为PPV的感染性在胎儿死后会缓慢的丧失，而且分离病毒耗时

7、很长，甚至有吋培养的细胞木來就己经污染。病毒分离和鉴定是PPV感染最为确切的诊断方法，但是费时费力，并且盂要一定的技术条件和设备。另外，其感染力会随着胎儿死亡时间而降低.从而限制了临床应用。2、血清学方法1.1血凝和血凝抑制试验1.1.1血凝(HA)试验：该试验即使在死广时间较长、病毒无污染性的木乃伊胎中也可检出抗原。1.1.2血凝抑制(HI)试验：是检测PPV抗体授常川的方法.一般采用试管法和微量法。利川H1检测人工感染PPV的猪.发现感染后5犬即可以检测到相应抗体。12〜14犬抗休滴度高达102

8、44096.并能持续多年检出抗体。待检血清进行HI试验时需要首先进行灭活处理.然后再用红细胞吸附，以除左血清中的非特异性血凝索，再用高岭土吸附以除去或减少血清中非特异性抑制因子。该方法虽能快速、大量的诊断，但灵敏度低、特界性不强，在低滴度感染时难以检出.只能作为辅助诊断方法。2.2血清中和试验(SN)血清中和试验是最经典、传统的血清学方法，它特异、敏感。其原理是利用被检血清的抗体中和PPV,然后根据培养细胞的病变情况來计算血清抗体的滴度。Joo等HI通过试验发现,SN