酶联免疫斑点试验在快速诊断结核杆菌感染性疾病中应用价值

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1、酶联免疫斑点试验在快速诊断结核杆菌感染性疾病中应用价值【摘要】目的：探讨酶联免疫斑点检测技术(ELISPOT)(T-SPOT.TB)在快速诊断结核杆菌感染性疾病中的临床应用价值。方法：利用ELISPOT检测对结核菌特异抗原刺激反应，分泌丫-干扰素的效应T淋巴细胞数量方法,对72例结核杆菌感染性疾病组和20例健康体检者组的外周血作能分泌结核特异的Y-干扰素的T淋巴细胞测定，与结核菌纯蛋白衍生物试验(PPD)、结核抗体检查结果进行比较分析。结果：T-SPOT.TB敏感性为91.7%,较PPD试验36.1%.抗结核

2、抗体55.6%和PPD试验+抗结核抗体29.2%均明显增高，P值均0.05),而较之结核抗体的特异性60.0%,在统计学上也具有显著差异(P0.05),但是较之抗结核抗体的特异性60.0%(12/20)有显著统计学差异(P3讨论T-SPOT-TB是以T细胞免疫应答为基础的V-干扰素(Y-IFN)释放实验，其原理是结核杆菌感染者外周血单核细胞(PBMC)中存在的特异性T细胞在受到抗原早期分泌性抗原靶蛋白6(ESAT-6)和培养滤过蛋白10(CFP-10)刺激后会分泌Y-IFN,释放的Y-IFN随即与微孔板底部包

3、被的Y-IFN抗体结合而形成免疫复合物，该复合物再与随后加入的碱性磷酸酶标记的抗抗体结合，继而分解分解随后加入的显色底物溶液而在反应部位形成不溶性色素沉淀斑点。每一个斑点代表1个V-IFN分泌细胞（结核特异的效应T细胞）。根据斑点数推测体内是否存在对结核杆菌反应的效应T细胞，从而对结核杆菌感染进行辅助诊断［3］。其中抗原ESAT-6和CFP-10为结核分枝杆菌和少数非结核分枝杆菌所特有，而不存在于卡介苗及大多数非结核分枝杆菌中［4］,因而从根本上避免了传统结核菌素皮试中所存在的BCG交叉抗原反应，从而确保了T

4、-SPOT•TB的高度特异性。本研究对92例受检者进行了T-SPOT-TB检测，结果表明其诊断结核的特异性和敏感性分别为95.0%和91.7%o这与国内外学者［5、6、7、8］的研究结果相似。而且整个检测过程，仅需24h。由于每份标本采用阴性、阳性对照，结果更加客观可靠、操作简便。通过使用仪器尚可实现自动化。说明ELISPOT法可快速检测外周血中的结核菌抗原特异T淋巴细胞的反应频率，对结核病的快速诊断提供可靠的客观依据。除了T-SPOT-TB检测以外，本研究对92例受检者还进行了PPD和结核抗体检查，结果表明

5、T-SPOT-TB诊断结核敏感性91.7%、准确率92.4%均显著高于PPD试验、抗结核抗体和PPD试验+抗结核抗体联合检验方法，具有显著统计学差异（P均0.05）o但是显著优于抗结核抗体的60%水平（P