酶联免疫斑点技术在小儿结核性脑膜炎诊断

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1、酶联免疫斑点技术在小儿结核性脑膜炎诊断讨酶联免疫斑点技术(ELISPOT)在小儿结核性脑膜炎诊断中的应用价值。方法：收集0～14岁疑似结核性脑膜炎患儿共17例进行ELISPOT检测，对最终确诊病例进行分析，并与头颅CT/MRI检查、结核菌纯蛋白衍生物试验（PPD）试验、脑脊液检查、结核抗体检查、胸片结果相对比。结果：在最终确诊的13例结核性脑膜炎中，头颅CT/MRI、PPD、脑脊液、结核抗体、胸片在入院5d内的检查阳性率分别为30.8％、30.8％、23.1％、12.5％、30.8％,而ELISP

2、OT阳性率为76.9％，显著高于其它辅助检查方法（P＜0.05)。结论：ELISPOT检查灵敏、快速，对于小儿结核性脑膜炎有早期诊断价值。　　酶联免疫斑点技术(enzyme-linkedimmunospotassay,ELISPOT)是一种从单细胞水平检测分泌抗体或细胞因子细胞的免疫学新技术〔1,2〕。近年来基于两种结核菌特异性抗原早期分泌抗原靶6(earlysecretoryantigentarget-6,ESAT-6)、培养滤液蛋白10(culturefiltrateprotein-10,CF

3、P-10)的ELISPOT技术以其敏感、特异、简便的优点被用于结核病的诊断，取得了较好的成效〔2～5〕，在欧美已被批准用于临床，但在国内尚处于试用阶段。我科将该项技术试用于小儿结核性脑膜炎（结脑）的辅助诊断，与其它常规辅助检查做对比，探讨ELISPOT在小儿结脑中的诊断价值。　　1资料与方法　　1.1临床资料收集我科2006年9月～2007年9月收治的0～14岁疑似结脑患儿共17例，诊断标准参照文献〔6〕，有其他明确中枢神经系统疾病者除外，并排除已经抗结核治疗超过1个月者。入选患儿男性8例，女性9

4、例，年龄2个月～14岁，平均6岁9个月，其中0～5岁7例，5～14岁10例，汉族6例，维吾尔族10例，蒙古族1例。　　1.2方法17例在入院5d内进行胸片、结核菌纯蛋白衍生物试验（PPD）、脑脊液、头颅CT/MRI检查，采集卡介苗接种史、卡介苗接种后疤痕、既往结核病史及结核病接触史资料，部分患儿进行了结核抗体检测。同期采集静脉血2～8ml,分离出外周血单个核细胞，利用ELISPOT试剂盒（OxfordImmunotecLtd.）进行检测,每人份4孔，分别为测试孔A、测试孔B和阳性对照、阴性对照，所

5、有试验操作步骤严格依据试剂盒内所附使用指导进行，最后用ChampSpotⅡTm型ELISPOT酶联斑点图像分析仪（北京赛智创业科技有限公司）进行计数分析。根据临床需要在15～40d进行头颅CT/MRI复查。　　1.3判断标准当阴性对照孔有0～5个斑点时，测试孔A或B斑点数－阴性对照孔斑点数≥6；或当阴性对照孔斑点数≥6时，测试孔A或B斑点数≥2倍阴性对照孔斑点数时结果判定为阳性；若阳性对照孔反应良好，但测试孔斑点数未达上述标准，则为阴性。　　1.4统计学处理采用SPSS13.0统计软件进行数据分析

6、,ELSPOT与其他诊断方法阳性率比较采用χ检验,检验水准α＝0.05。　　2结果　　2.1一般情况17例中临床确诊结脑13例（76.5％），其余4例（23.5％）分别为病毒性脑炎2例，中毒性脑病1例，化脓性脑膜炎1例。13例结脑病例中有卡介苗接种后疤痕者5例（38.5％），有明确结核病接触史者4例（30.8％），结脑临床分期早期2例（15.4％），中期10例（76.9％），晚期1例（7.69%，死亡），合并粟粒性肺结核2例（15.4％）。　　2.2ELSPOT试验结果在确诊结脑的13例中，经

7、ELSPOT检测阳性10例（76.9％），阴性3例（23.1％）。非结脑病例中ELSPOT检测无1例阳性。典型ELSPOT结果见图1。　　注：每孔左上角数字为ELISPOT酶联斑点图像分析仪自动计数结果　　图1典型ELSPOT结果（略）　　2.3ELISPOT与其它各种方法检查阳性率的比较确诊结脑13例中，入院5d内ELISPOT阳性率为76.9％，头颅CT/MRI、PPD、脑脊液、结核抗体、胸片检查的阳性率分别为30.8％、[JP2]30.8％、23.1％、12.5％、30.8％,ELISPO

8、T阳性率显著高于其它辅助检查（P＜0.05)。经过复查，入院40d头颅CT/MRI阳性率达到61.5%,与ELISPOT早期阳性率对比差异无统计学意义（P＞0.05)(表1)。　　表1ELSPOT与其它各种方法检查阳性率的比较（略）　　注：(1）PPD试验结果以72h硬结直径≥5mm为阳性；(2）以同时进行了ELISPOT和结核抗体检测的人数进行配对χ检验　　3讨论　　结脑是最严重的肺外结核病，约占儿童结核病死亡的75%，延误诊断是死亡的主要原因〔7〕，早期诊断、合理治疗可以明显改