斑点酶免疫渗滤法定量检测雌三醇的实验研究.pdf

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1、874志(ChinJCellMolImmuno1)2013，29(8·论著·文章编号：1007—8738(2013)08-0874-03斑点酶免疫渗滤法定量检测雌三醇的实验研究薛添，赵轶君，董洁，李红民(西北大学生命学院，陕西西安710069)[摘要]目的制备高特异性的抗雌三醇(E3)单克隆抗体(mAb)，建立操作简便、敏感、快速适用于基层使用的E3检测方法。方法采用活化酯法制备偶联物E3．HRP、E3．BSA、3-OVA。应用mAb技术制备抗E3的mAb；以硝酸纤维素膜为固相载体，抗E3mAb为包

2、被抗体，建立竞争抑制模式的斑点酶免疫渗滤法。结果筛选出5株可分泌特异性抗E3mAb的杂交瘤细胞株。mAb效价为1X10～5×10，亲和常数为5．1X10。-5．2X10L／tool。检测敏感度为2ng／mL，检测范围2—200ng／mL。结论建立了检测速度快、灵敏度高、应用方便的斑点酶免疫渗滤法。[关键词]斑点免疫酶渗滤法；雌三醇；单克隆抗体[中图分类号]R392．11，R446．61，Q813．2[文献标志码]AEstj

3、bl嗍吐0fthedotinmmnoenzyInefiltrationass

4、ayforquantitivedetection0festriolXUETian，ZHAOYijun，DONGJie，LIHongminCollegeofLifeScience，NorthwestUniversity，Xi’all710069，China[Abstract]ObjectiveTomakeanti—estriol(E3)monoelonalantibody(mAb)withhighspecificity，anddeveloparapid，simpleandsensitwemethodf

5、orthedetectionofE3incounty·levelinstitutions．MethodsThecompoundsofE3wereconju—gatedtohorseradishperoxidase(HRP)，bonineserumalbumin(BSA)andovalbumin(OVA)respectivelybythemethodofactiveester．andthehybridomacellIinessecretingspecificanti-E3mAbweredevelope

6、dv／amonoclonaIantidodytechnology．Thedotimmunoenzymefiltrationassayincompetitive-inhibitionfOrmatwasestablishedwithnitrocellulosemembraneassolid-phasecarderandanti-BmAbascoatingantibody．Results5hybddornaeelIIiressecretingspecificanti-E3mAbwereobtainedwi

7、thE3一mAbt_tersintherangeof1X10to5×10andtheafinityconstant(Ka)from5．1X10L／moIto5．2X10L／moI．TheIimitofdetecting(LOD)valueforE3was2no／mLandthedetectionrangewas2-200no／mL_CondusionThedotimmu—noenzymefiltrationassaywithhigh-speeddetection，easyaccessibilitya

8、ndhighsensitivitywassucessfullyestablished．1Keywords]dotimmunoenzymefiltrationassay(DIEFA)：estrioI：monoclonaIantibody雌激素(estrogen)属类固醇激素，主要包括雌二期妊娠、胎儿官内窒息、葡萄胎、胎儿先天畸形等，醇(estradiol，E2)、雌酮(estrone，E1)和雌三醇若连续测定下降达50％表示胎儿宫内有窘迫现象，(estriol，E3)。E3是E1和E2的分解代谢产物，

9、具怀有Dawn综合征胎儿的母血中uE3的水平比正常有弱雌激素活性。在体内E2首先降解生成E1，El妊娠水平平均低29％。因此，快速、准确地检测血又进一步转化生成E3，El和E2在体内可以互相转清或尿液中uE3的含量具有重要意义。斑点酶免疫化，而E3的生成是不可逆的，即E3生成后不能逆渗滤法(dot-immunoenzymetitrationassay，DIEFA)，转化为E2。作为雌二醇和雌酮的降解产物，游离雌是将酶免疫技术与快速免疫斑点技术相结合形成的三醇(unco