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时间:2020-05-09
《斑点酶免疫渗滤法定量检测雌三醇的实验研究.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、874志(ChinJCellMolImmuno1)2013,29(8·论著·文章编号:1007—8738(2013)08-0874-03斑点酶免疫渗滤法定量检测雌三醇的实验研究薛添,赵轶君,董洁,李红民(西北大学生命学院,陕西西安710069)[摘要]目的制备高特异性的抗雌三醇(E3)单克隆抗体(mAb),建立操作简便、敏感、快速适用于基层使用的E3检测方法。方法采用活化酯法制备偶联物E3.HRP、E3.BSA、3-OVA。应用mAb技术制备抗E3的mAb;以硝酸纤维素膜为固相载体,抗E3mAb为包
2、被抗体,建立竞争抑制模式的斑点酶免疫渗滤法。结果筛选出5株可分泌特异性抗E3mAb的杂交瘤细胞株。mAb效价为1X10~5×10,亲和常数为5.1X10。-5.2X10L/tool。检测敏感度为2ng/mL,检测范围2—200ng/mL。结论建立了检测速度快、灵敏度高、应用方便的斑点酶免疫渗滤法。[关键词]斑点免疫酶渗滤法;雌三醇;单克隆抗体[中图分类号]R392.11,R446.61,Q813.2[文献标志码]AEstj
3、bl嗍吐0fthedotinmmnoenzyInefiltrationass
4、ayforquantitivedetection0festriolXUETian,ZHAOYijun,DONGJie,LIHongminCollegeofLifeScience,NorthwestUniversity,Xi’all710069,China[Abstract]ObjectiveTomakeanti—estriol(E3)monoelonalantibody(mAb)withhighspecificity,anddeveloparapid,simpleandsensitwemethodf
5、orthedetectionofE3incounty·levelinstitutions.MethodsThecompoundsofE3wereconju—gatedtohorseradishperoxidase(HRP),bonineserumalbumin(BSA)andovalbumin(OVA)respectivelybythemethodofactiveester.andthehybridomacellIinessecretingspecificanti-E3mAbweredevelope
6、dv/amonoclonaIantidodytechnology.Thedotimmunoenzymefiltrationassayincompetitive-inhibitionfOrmatwasestablishedwithnitrocellulosemembraneassolid-phasecarderandanti-BmAbascoatingantibody.Results5hybddornaeelIIiressecretingspecificanti-E3mAbwereobtainedwi
7、thE3一mAbt_tersintherangeof1X10to5×10andtheafinityconstant(Ka)from5.1X10L/moIto5.2X10L/moI.TheIimitofdetecting(LOD)valueforE3was2no/mLandthedetectionrangewas2-200no/mL_CondusionThedotimmu—noenzymefiltrationassaywithhigh-speeddetection,easyaccessibilitya
8、ndhighsensitivitywassucessfullyestablished.1Keywords]dotimmunoenzymefiltrationassay(DIEFA):estrioI:monoclonaIantibody雌激素(estrogen)属类固醇激素,主要包括雌二期妊娠、胎儿官内窒息、葡萄胎、胎儿先天畸形等,醇(estradiol,E2)、雌酮(estrone,E1)和雌三醇若连续测定下降达50%表示胎儿宫内有窘迫现象,(estriol,E3)。E3是E1和E2的分解代谢产物,
9、具怀有Dawn综合征胎儿的母血中uE3的水平比正常有弱雌激素活性。在体内E2首先降解生成E1,El妊娠水平平均低29%。因此,快速、准确地检测血又进一步转化生成E3,El和E2在体内可以互相转清或尿液中uE3的含量具有重要意义。斑点酶免疫化,而E3的生成是不可逆的,即E3生成后不能逆渗滤法(dot-immunoenzymetitrationassay,DIEFA),转化为E2。作为雌二醇和雌酮的降解产物,游离雌是将酶免疫技术与快速免疫斑点技术相结合形成的三醇(unco
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