莲白消癌丸提取工艺研究

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1、莲白消癌丸提取工艺研究【摘要】目的用正交试验法筛选莲白消癌丸提取工艺。方法以总浸出率、野黄芩苷提取率为评价指标，选择加水量（倍）、提取次数、提取时间（h）为考察因素，利用正交实验L9（34）确定了莲白消癌丸的提取工艺。结果最佳工艺条件为提取3次，分别加水8倍量、6倍量、4倍量，提取时间分别为2，1.5，1h。结论加水量、提取次数、提取时间对该工艺均有显著影响。【关键词】莲白消癌丸；浸膏；野黄芩苷；正交实验莲白消癌丸系临床经验方，用于肝癌、胃癌等肿瘤的治疗。处方由半枝莲、白花蛇舌草、半夏、黄芪等15味中药组成，具有清热解毒、消肿散瘀等功效。现以水作为提取溶剂并选择水总浸出物得率、野

2、黄芩苷提取率为评价指标［1～3］，对其进行提取工艺研究。根据预试结果，采用L9（34）正交实验优选提取工艺条件，为莲白消癌丸工艺研究提供参考。　　1仪器与材料　　1.1仪器岛津高效液相色谱系统，包括LC-10ATVP泵，SPD-10AVP紫外光检测器，science柱温箱，Ckchrom-ehromatography数据采集系统；BP211D型分析天平（德国赛多利斯）。　　1.2材料本处方中药材均购自郑州市药材公司，经河南中医学院陈随清教授鉴定均为正品。野黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用，批号：880-200701，含量96.14%）；甲醇为色谱纯，其它试剂

3、均为分析纯。半枝莲药材中野黄芩苷的含量为0.57％。　　2方法与结果　　2.1提取方法设计该制剂采用水煎提，正交实验方法对加水量（因素A）、煎煮次数（因素B）、煎煮时间（因素C）3个因素进行考察，根据预试结果采用L9（34）正交表安排实验，因素水平设计见表1。将处方中提取药材按照L9（34）正交表规定的因素水平煎煮提取，滤过合并提取液，减压浓缩至相对密度1.3（60℃），60℃减压干燥，得提取物。表1因素水平表（略）　　2.2考察指标测定　　2.2.1水总浸出物的测定方法分别精密量取水提药液20ml，按浸出物测定法(《中国药典》2005年版Ⅰ部附录XA)操作，以20ml提取液相当

4、于原药材量作为分母，以干燥品计算供试品中水溶性浸出物的浸出率。　　2.2.2野黄芩苷含量测定方法色谱条件：色谱柱为依利特C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相为甲醇-水-醋酸（33∶63∶4）［4］；检测波长335nm；流速1.0ml/min；柱温为室温。　　供试品溶液的制备：取工艺考察项下方法制备的样品干浸膏约6g，精密称定，加石油醚（60～90℃）100ml回流2h，弃去醚液，残渣挥干,加甲醇100ml，80ml回流提取两次，1h/次，过滤，合并滤液浓缩，甲醇定容于100ml量瓶中，即得［5］。　　对照品溶液的制备：精密称取野黄芩苷对照品8mg,置100ml量瓶中

5、，加甲醇制成每毫升中含80μg的溶液，摇匀，即得。　　系统适应性试验：分别精密吸取对照品溶液、阴性样品溶液、供试品溶液各10μl，进样。结果表明，野黄芩苷色谱峰理论塔板数大于1500，阴性样品在野黄芩苷色谱峰位置无干扰。结果见图1。　　2.2.3工作曲线的制备从野黄芩苷对照品中分别精密量取2，4，6，8，10μl，注入液相色谱仪中测定。以野黄芩苷进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，计算得回归方程为Y=1006970.06X-14550.57，r=0.9986，其中：Y-代表峰面积，X-代表进样量。表明野黄芩苷进样量在0.16～0.8μg与峰面积呈良好的线性关系。　　2.2.4样品测定

6、取按各提取工艺制备的样品约6.0g，精密称定，按照供试品溶液的制备方法制备供试液并测定。结果见表2。　　由上表：采用综合加权评分的方法，分别将水总浸出物得率、野黄芩苷提取率两项指标加权评分。处方中半枝莲为君药，其主成分野黄芩苷的权重系数设为0.6，水总浸出物得率项的权重系数为0.4。故综合加权评分公式为Y=0.4X(Y1+69.8)+0.6X(Y2+52.4)。对正交实验的结果进行数据处理和方差分析。结果见表2～3。方差分析显示，A因素的影响具有高度显著性意义、C因素的影响具有显著性意义。由极差直观分析可知A>C>B，因此确定，莲白消癌丸水提取的最佳工艺为A3B1C1

7、。即提取3次，分别加水8倍量、6倍量、4倍量，提取时间分别为2，1.5，1h。表2实验结果及分析（略）表3综合加权方差分析（略）　　2.3验证实验结果见表4。从实验结果可以看出，所筛选出来的工艺合理可行，稳定可靠，具有可操作性和重复性。表4验证实验结果（略）　　3讨论　　在预试中野黄芩苷用甲醇作溶剂，溶解性较好，醋酸乙酯、正丁醇做提取溶剂效果均不如甲醇，故采用甲醇作溶剂。高效液相色谱法测定野黄芩苷含量时，用乙腈-水加入少量的醋酸为流动相以不同的比例考察，分离效果不如以甲醇-水加入