正交试验法优选肾炎消白颗粒提取工艺探究

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1、正交试验法优选肾炎消白颗粒提取工艺探究【摘要】：目的：优选肾炎消白颗粒最佳提取工艺。方法：以提取液中黄芪甲苷的含量及总固体得率为指标，采用正交试验法，优选肾炎消白颗粒的最佳提取工艺。结果：优选的提取工艺为：70%乙醇8倍量体积，回流提取2h，共提取2次。结论：优选出的提取工艺稳定、合理、可行，适用于生产。【关键词】正交试验法；肾炎消白颗粒；提取工艺；黄芪甲苷肾炎消白颗粒是治疗慢性肾小球肾炎、肾病综合征的一种医疗机构制剂，由黄芪、土茯苓等12味常用中药组成的纯中药制剂，具有益气养阴、清热解毒利湿的功

2、能。经过多年的临床实践验证其疗效确切，深受广大患者的欢迎。现行工艺是原料全部水提取浓缩后制颗粒，工艺简单，服药量大。我们根据方中药材成分的性质和现代药理学研究结果，针对脂溶性成分的药材黄芪、土茯苓、党参、熟地等用乙醇提取，药渣再与其余药材一同水提取。本处方中黄芪为君药，黄芪甲苷为其主要活性成分之一，因此本实验以黄芪甲苷的含量及浸膏得率为指标进行综合评分，采用正交试验法优选其脂溶性成分药材的提取工艺。71仪器与材料1.1仪器P680HPLC高效液相色谱（美国戴安公司）、Alltech2000-ELS

3、D检测器；BT205S型电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)；DL-360A型台式超声仪(上海之信仪器有限公司)；DHG-924A型电热恒温鼓风干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）；1.2材料甲醇、乙腈美国天地（TEDIA）试剂公司，HPLC级；其余试剂为国产分析纯黄芪甲苷（批号：10781-200512）购于中国药品生物制品检定所黄芪、土茯苓、党参、熟地等药材均购于哈尔滨世一堂中药材饮片厂。2试验方法与结果2.1正交试验设计根据相关资料和有关预试验结果[1],本实验采用L9(34)正交表,对影

4、响提取工艺的主要因素乙醇浓度，溶剂体积，提取时间，提取次数，进行了探讨。以浸膏得率及黄芪甲苷含量为评价指标,采用综合评分法进行数据分析,其权重系数分别取0.4、0.6。因素水平表见表1。表1醇提取工艺考察因素与水平7因素1水平23A（乙醇浓度C）50%70%95%B（溶媒体积V）6倍8倍10倍C（提取时间T）1h1.5h2hD（提取次数n）1次2次3次2.2样品液的制备根据肾炎消白颗粒原处方比例称取上述中药材样品9份，每份约50g（其中黄芪约8g），按照正交试验表的条件安排试验，经提取得9份样品醇

5、提液，蒸干后用甲醇定容到100m1，再用移液管移取50ml，蒸干，残渣加水20ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇提取3次，每次30ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次30ml，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣用甲醇溶解并定容到5ml容量瓶中，备用。2.3肾炎消白颗粒黄芪甲苷的含量测定2.3.1色谱条件[2]色谱柱迪马公司DiamonsilODS(4.6mm×250mm,5μm)；流速1.0ml/min；柱温30℃；进样量20μl；流动相乙腈-水（36:64）；漂移温度101.5℃；氮气流速2

6、.8L/min。72.3.2线性关系考察精密称取干燥至恒重的黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成0.4732mg/ml的溶液，摇匀即得。精密吸取上述对照品溶液5μl、10μl、15μl、20μl、25μl、30μl注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积对数值lgA为纵坐标，进样量对数值lgM为横坐标进行线性回归，得回归方程lgA=9.3991+1.4538lgM，r=0.9996。结果表明，黄芪甲苷在2.3660～14.1960μg范围内呈良好的线性关系。2.3.3精密度实验精确吸取对照品溶

7、液20μl，按上述色谱条件测定，连续进样5次，测定峰面积。以峰面积大小计算RSD=0.96％(n=5)，结果表明测定系统精密度良好。2.3.4重复性实验精密称取按处方比例混合药材约25g，按2.2.项下平行制备5份样品溶液，分别进样25μl，测定黄芪甲苷的含量。经计算，黄芪甲苷含量的RSD为0.48％，表明测定方法重现性良好。2.3.5稳定性实验精密称取同一份样品溶液，于室温下每隔4小时进样，共进样6次，经计算其峰面积的RSD=0.67％(n=6)，表明检测系统条件下，样品溶液24h内稳定性良好。

8、2.3.6加样回收率实验精密称取已知含量的处方比例混合药材5份，每份约25g，分别加入一定量的黄芪甲苷对照品，依法制备样品溶液，分别进样20μl，测定黄芪甲苷的含量。5个样品的加样回收率分别为99.8％，100.5％，101.4％，99.9％，98.9％，101.1％，平均加样回收率为100.3％，RSD为0.92%(n=5)。表明该测定方法结果准确。2.3.7样品测定72.3.7.1黄芪甲苷含量的测定精密吸取2.2.项下l～9号样品液各20μl，按色谱条件检测。(正交试验结果见表