苦蘵多糖的提取及体外抗氧化活性的研究

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1、苦蘵多糖的提取及体外抗氧化活性的研究【摘要】目的研究苦蘵多糖的醇沉条件及其体外抗氧化活性。方法经超声提取，除脂，除蛋白等工艺得到苦蘵粗多糖，并考察了醇沉条件(醇沉比、温度、pH、时间、浓缩比)对多糖沉淀的影响。采用体外实验研究了苦蘵多糖对·OH和DPPH的清除作用及对大鼠肝匀浆脂质过氧化的抑制作用。结果在最佳的醇沉条件(浓缩比4∶1,温度-20℃，醇沉时间16h，醇沉比为1∶4，pH为7)下，多糖提取率为3.15%。多糖对大鼠肝匀浆脂质过氧化的抑制率可达80%,对·OH和DPPH也都有很好的清除作用。结论苦蘵果实中多糖有良好的体

2、外抗氧化活性。【关键词】苦蘵多糖抗氧化　　Abstract:ObjectiveTostudytheantioxidantactivitiesofpolysaccharideextractedfromPhysalispubescensL..MethodsPolysaccharidePhysalispubescensL.fruitbyultrasonicmethod,thecontentinedbyspectrophotometry,theinvitroscavengingactivitiesofpolysaccharideonhy

3、droxylradicalandDPPH,anditsprotectiveeffectsonlipidperoxidationofliverhomogenateinratsogenateinrats.ConclusionTheseresultssuggestthatthepolysaccharideextractedfromPhysalispubescensL.hasgoodantioxidantactivitiesinvitro.　　Keya公司，2-硫代巴比妥酸上海国药集团化学试剂有限公司，其他试剂均为国产分析纯；5810R

4、型冷冻离心机德国Eppendorf公司，723型可见分光光度计山东高密彩虹分析仪器有限公司，RE-52AA型旋转蒸发器上海雅荣生化设备仪器有限公司，BP221S型电子天平德国赛多利斯。　　1.2多糖的提取及初步分离纯化称取苦蘵鲜果1000g烘干，加一定量的水60in，8000r/min离心7min，上清液抽滤后浓缩，用醋酸乙酯加热回流1h进行除脂脱色［2］，再用Sevage法［3］去除蛋白得粗多糖。　　1.3醇沉条件的研究　　1.3.1浓缩比将粗多糖溶液浓缩后，分别加入4倍体积95%的乙醇，4℃下醇沉12h。多糖用一定量的蒸馏水

5、溶解后测定含量。　　1.3.2温度取3份粗糖溶液分别加入4倍体积的95%乙醇，然后置于-20℃，4℃，室温（25℃）进行醇沉。溶解后分别测其多糖含量。　　1.3.3醇沉比取5份粗糖液分别以1∶1,1∶2，1∶3，1∶4，1∶5（糖液∶95%乙醇）比例加入乙醇。在4℃醇沉12h。溶解后测多糖含量。　　1.3.4醇沉时间［4］分别选择4，8，12，16，18，20，24h进行多糖含量检测，其他条件均按摸索的最佳条件设置。　　1.3.5pH分别选择pH为4，5，6，7，8，9,6个值进行多糖含量检测，其他条件均按摸索的最佳条件设置。　

6、　1.4体外抗氧化的研究　　1.4.1对·OH的抑制作用［5］采用亚铁离子催化过氧化氢产生·OH（根据Fenton反应原理），由于·OH可特异地使番红褪色，根据褪色程度用比色法来测量·OH的含量。4ml体系中包含150mmol/L,pH=7.4的磷酸缓冲溶液1.5ml，260μg/ml番红花红0.2ml，0.56mmol/L乙二胺四乙酸二钠(Fe2+﹣EDTA)0.7ml,1%H2O20.8ml，各浓度糖液0.8ml。　　1.4.2对肝脂质过氧化的抑制［6］过氧化脂质的二级分解产物丙二醛能与硫代巴比妥酸反应生成红色产物，在532

7、nm处有最大吸收。大鼠脱颈处死后迅速分离肝组织，用生理盐水洗净,冰浴下匀浆，制成0.5%的肝匀浆液。取匀浆液各1ml，加入不同质量浓度的糖液1ml和6mmol/L,EDTA-Na-Fe（Ⅱ）100μl,最后加60mmol/LH2O2100μl。以生理盐水代替糖液和H2O2为空白，以生理盐水代替糖液为对照，整个体系为2.2ml。在37℃下水浴1h后，加入1ml15%TCA终止反应，再加入1ml体积分数0.7%TBA,于沸水中显色15min,冷却后离心，测532nm处上清液的OD值。　　1.4.3对有机自由基DPPH的清除作用［7］

8、DPPH分光测定法的测定原理是依据DPPH在517nm处有一强吸收峰,其乙醇溶液呈深紫色。当有自由基清除剂存在时,由于与其单电子配对而使其吸收逐渐消失,其褪色程度与其接受的电子数量成定量关系,因而可用分光法进行定量分析。抗氧化活性以清除DPPH自由基能力大小表示