放射联合sorafenib对肝癌细胞的不同时效作用

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1、放射联合Sorafenib对肝癌细胞的不同时效作用：李巧巧，刘孟忠，王莉，李锦清【摘要】【目的】在人肝癌细胞中观察放射联合Sorafenib对细胞生长的作用，并探讨其作用途径。【方法】选择人肝癌SMMC-7721和BEL-7402细胞株，分为单纯放射组(IR)、放射前30min联合Sorafenib组(IR+S-pre)和放射24h后联合Sorafenib组(IR+S-post)。细胞克隆形成实验检测照射后细胞克隆形成率，绘制细胞存活曲线并计算放射增敏比;细胞增殖抑制实验检测6Gy照射后第1、2、3、4、5、6d细胞增殖情况;免疫荧光染色观察照射后DNA损伤阳性细胞比例

2、;流式细胞仪检测放射后细胞凋亡比例。【结果】细胞克隆形成实验结果显示，IR+S-pre放射后细胞克隆形成增加，放射增敏比在SMMC-7721和BEL-7402细胞中分别为0.78和0.88;而IR+S-post放射后细胞克隆形成减少，放射增敏比在SMMC-7721和BEL-7402细胞中分别为1.43和1.23。细胞增殖抑制实验显示IR+S-pre与IR放射后细胞增殖抑制率相似，而IR+S-post放射后细胞增殖抑制率明显提高。Sorafenib在SMMC-7721与BEL-7402中均有诱导细胞凋亡作用。IR+S-pre在放射后24h细胞凋亡比例明显增高[IRvsIR

3、+S-pre：(6.1±1.0)%vs(18.3±2.0)%(SMMC-7721)，(8.2±2.1)%vs(17.0±2.4)%(BEL-7402)，P<0.001]。IR+S-post在放射后48h细胞凋亡比例明显增高，[IRvsIR+S-post分为(6.9±2.0)%vs(15.9±1.8)%(SMCC-7721)，(8.0±1.5)%vs(14.2±2.5)%(BEL-7402)，P<0.05]。放射后30min，IR+S-pre与IR的DNA受损阳性细胞比例无明显差异。放射后6hIR+S-pre的DNA受损阳性细胞残留比例明显下降[IRvsIR+

4、S-pre：(59.9±2.4)%vs(23.8±2.9)%(SMMC-7721)，(46.4±3.8)%vs(25.0±3.0)%(BEL-7402)，P<0.001]。【结论】放射联合Sorafenib对肝癌细胞作用具有明显时效性，放射24h后联合Sorafenib增加放射引起的细胞克隆性生长抑制和增殖抑制，而放射前30min联合Sorafenib作用相反。【关键词】肝癌;放射;索拉非尼;凋亡;DNA损伤修复　Abstract：【Objective】Theeffectofradiationbinedacells(HCC)andthemechanismofbin

5、ationinpre-irradiaiton(IR+S-pregroup)andradiationorcellsageafterirradiationinedrespectivelythroughγ-H2AXfocusbyimmunoflurescence.Theapoptosiscellsinedbyfloetry.【Result】TheHCCcellshadmorecoloniesandsimilarproliferationinhibitorbyIR+S-pre，andlesscoloniesandhigherproliferationinhibitorbyIR+

6、S-postparedL/L新生牛血清的RPMI1640完全培养液(内含100u/mL青霉素和100μg/mL链霉素)，置于37℃、体积分数5%CO2、湿度85%恒温培养箱培养，取指数生长期细胞进行实验。　　1.2实验材料　　Sorafenib购自Bayer公司，DMSO溶解后以常规培养液稀释。终浓度为15μmol/L的Sorafenib中，DMSO质量浓度为0.06%(下同)。　　1.3实验分组　　对照组(Control)，单纯加入0.06%DMSO作用24h;单纯放射组(IR)，除给予放射外，其处理与对照组相同;放射前30min联合组(IR+S-pre)，放射前30

7、min加入终浓度15μmol/LSorafenib，作用24h;放射24h后联合组(IR+S-post)，放射24h后加入15μmol/LSorafenib，作用24h。　　1.4照射条件　　使用钴60机，室温环境下照射，照射时表面覆盖1cm有机玻璃板，等距离照射。　　1.5细胞克隆形成实验　　取指数生长期细胞消化、悬浮、计数后，根据不同细胞株与不同照射剂量接种6孔板，每组3个平行处理孔。接种后培养12h待细胞贴壁，按不同处理组要求加入DMSO或Sorafenib，分别照射0、2、4、6、8、10Gy。培养10d(SMMC-7721)或1