更昔洛韦体外抗人巨细胞病毒的实验研究

《更昔洛韦体外抗人巨细胞病毒的实验研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、更昔洛韦体外抗人巨细胞病毒的实验研究：顾绍庆，顾小海,陈慧娟，李继安，叶亮英，郑意【摘要】　　目的：探讨更昔洛韦体外抑制人巨细胞病毒（humancytomegalovirus，HCMV）的作用方式。方法：根据病毒复制周期设计3种作用模式来观察更昔洛韦对HCMV的抑制作用：模式Ⅰ将病毒与细胞混合后，再加入药物；模式Ⅱ将药物与细胞混合后，再加入病毒；模式Ⅲ将药物与病毒混合后再加入细胞。通过观察细胞病变效应，用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞存活率，以确定该药物治疗指数。结果：更昔洛韦对人胚成纤维细胞半数中毒浓

2、度(TC50)为1685.23mg/L。在模式Ⅰ中，更昔洛韦对HCMV半数抑制浓度(IC50)为35.255mg/L，治疗指数为47.8；在模式Ⅱ和Ⅲ中，更昔洛韦对HCMV无明显抑制作用。结论:更昔洛韦对HCMV感染细胞后显示出显著的抑制作用，且随药物浓度的增加其作用逐渐增强，存在明显的量效关系。同时，体外实验显示，更昔洛韦对人胚成纤维细胞感染HCMV无预防作用。【关键词】更昔洛韦；人巨细胞病毒；细胞病变效应；噻唑蓝比色法　　［Abstract］Objective:Tostudytheinhibitor

3、yeffectofGanciclovir（GCV）onhumancytomegalovirus(HCMV)invitro.Methods：Accordingtoviralreplicationcycle，threeantiviralmethodsonolayersehours，itediumcontainingdifferentserveddrug.MethodⅡ,humanembryofibroblastcellsedium.Virusdrugmixedmediumeansofobservingcy

4、topathiceffectandadoptingMTTcolorimetricassayforcellsurvivalrate，theirtherapeuticindexanembryofibroblastcellsg/L.BymethodⅠ，the50%inhibitoryconcentrations(IC50)ofGCVforHCMVg/L.BymethodⅡandⅢ，GCVshoentationrevealedthatGCVcanresistHCMV，andtheinhibitioneffect

5、anembryofibroblastcells′infectionbyHCMVinvitro.　　［Keyancytomegalovirus；cytopathiceffect；MTTcolorimetrymethod　　人巨细胞病毒（humancytomegalovirus，HCMV）属疱疹病毒科β亚科，在我国人群中普遍感染，是母婴宫内和产后感染最常见的病原体之一，可引起死胎、胎儿畸形、流产、发育迟缓和肝功能异常等病理损害［1］，是造成儿童先天畸形、神经系统发育迟缓、听力和视力障碍、血液系统病变和婴儿肝

6、炎等严重疾病的主要病原体。同时，HCMV感染也是机体免疫功能低下的人群，如器官移植或者AIDS患者并发感染死亡的常见原因之一［2］。　　更昔洛韦（Ganciclovir，GCV）是目前临床抗HCMV的首选药物，是第一个通过美国FDA认证的抗HCMV药物。但是，在其使用过程中可能存在不同程度的毒副作用甚至潜在的危险性［3］，临床医师和患者对该药物的使用均存在一定的疑虑。本研究根据细胞、病毒和药物之间的相互作用，设计3种作用模式，探索更昔洛韦的最佳作用模式，为临床合理用药提供依据。　　　　　　　1材料与方法

7、　　1.1材料　　1.1.1细胞　　人胚成纤维细胞由安徽医科大学微生物教研室按常规方法制备，并且经PCR法检测，排除其他疱疹病毒感染。实验采用4～12代细胞。细胞生长液用高糖DMEM配制，含10%新生小牛血清，100kU/L青霉素，100mg/L链霉素。细胞维持液除新生小牛血清含量为2%外，其余成分同细胞生长液。　　1.1.2病毒　　HCMVAD169由安徽医科大学微生物教研室提供，按常规增殖至实验需求量，测定半数组织培养感染数量（TCID50）为10-4.67/0.1ml。　　1.1.3药物　　注射

8、用更昔洛韦购于山东罗欣药业股份有限公司，批号：国药准字H20044588，冻干粉针，每支50mg。将更昔洛韦溶于注射用水中，配制成10g/L浓度，临用时用不含抗生素维持液配成不同浓度的溶液。　　1.1.4主要试剂　　高糖DMEM粉剂购自Gibco公司，噻唑蓝(MTT)、PBS、胰蛋白酶及二甲基亚砜(DMSO)均为Amresco公司产品，新生小牛血清（四季青公司）。　　1.1.5主要仪器设备　　CO2细胞培养箱(Heraeus公司)、倒置显微