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《丹曲林钠对类缺血小鼠皮质神经元的［ca2+］i和细胞活力的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、丹曲林钠对类缺血小鼠皮质神经元的［Ca2+］i和细胞活力的影响：高军宪，万琪，田晔，李力，刘勇红【关键词】,钙离子 【Abstract】AIM:Tostudythechangesofintracellular［Ca2+］andcellactivityincorticalneuronsfolloiclikeconditioningandtoexploretheprotectiveeffectsofdantroleneontheneurons.METHODS:Neuronseasuredbyfluorescentintensity(FI)ineac
2、hcellicroscopyandthedegreeofinjuredneuronsinischemiclikeconditioning,arapidincreaseinfluorescenceintensityicgroupandtherapygroup(P>0.05).TheAvalueofinjuredneuronsinischemicgroupiclikeconditioning. 【Key;ischemiclike;dantrolene 【摘要】目的：观察类缺血后神经元内钙离子浓度及细胞活性的变化,探讨缺血性神经元的损伤与细胞
3、内钙离子的关系及丹曲林钠（Dantrolene）的作用.方法：采用孕小鼠皮层神经元培养技术，应用相差显微镜观察培养的神经元形态，激光共聚焦扫描显微镜检测细胞内钙离子浓度.结果：给予神经元类缺血处理5min后,神经元内钙离子浓度与丹曲林钠组无显著差异(P>0.05).类缺血处理10min后再灌注15min细胞损伤程度较丹曲林钠干预组［Ca2+］i和MTT有显著性差异(P<0.01).结论：丹曲林钠可抑制神经元细胞内钙离子浓度的升高,降低缺血性神经元损伤的程度. 【关键词】钙离子；类缺血；丹曲林钠 0引言 神经元对缺血、缺氧十分敏感
4、，即使时间很短也会造成不可逆损伤，而这种损伤机制非常复杂，至今尚未阐明，但损伤后细胞内钙离子浓度升高是细胞损伤的重要原因，细胞Ca2+信号转导异常被认为是神经细胞死亡的“最后共同通道”.我们采用Flu3/AM为钙离子指示剂，参照Mitani等［1］法建立类缺血模型，采用激光扫描共聚焦技术［2］，监测缺血期间钙离子的变化并采用MTT比色试验观察缺血神经元的损伤情况，观察丹曲林钠（Dantrolene）的作用. 1材料和方法 1.1材料①动物：孕15d昆明种二级孕鼠(体质量100g)由第四军医大学实验动物中心提供（陕动字003号）.②主要试剂和仪
5、器：胎牛血清由杭州四季青公司提供，DMEM由Gibco公司提供，胰酶由华美公司提供.CO2培养箱由Sanyo公司提供. 1.2方法 1.2.1激光扫描共聚焦显微镜专用培养皿的处理在直径60mm塑料培养皿中央钻一直径10mm的圆孔，将18mm×18mm盖玻片用加拿大胶粘于孔底部，消毒后使用. 1.2.2配制人工脑脊液其组成为（mmol・L-1）：NaCl123,KCl3.75,KH2PO41.25,NaHCO326,MgCl21,CaCl22,葡萄糖10，pH=7.4. 1.2.3细胞培养取孕15d昆明种二级孕鼠，引臼脱颈处死
6、,碘酒乙醇消毒腹部,逐层剖开腹部,取出胎鼠,仔细剥离胎膜羊膜,暴露胎鼠,体视显微镜下剥离脑膜,分离胎鼠大脑脑泡外侧部的皮质,剪碎脑组织,经1.25g・L-1的胰酶消化(37℃,25min),静置2~3min弃上清,200g・L-1胎牛血清的DMEM终止消化5~8min,以完全培养基(100mL・L-1胎牛血清,青、链霉素1×1011U・L-1)稀释至7×108・L-1密度并接种于经多聚赖氨酸(Sigma)处理过的专用培养皿和96孔板(细胞接种1×105/孔),送入含50mL&#
7、12539;L-1CO2和950mL・L-1O2的培养箱(Sanyo公司),37℃,培养48h后,加入阿糖胞苷(5mg・L-1)以抑制非神经元的继续生长,每隔2d半量换液,培养10d后,可见典型的神经元细胞，经βtubulin免疫荧光染色显示80%以上细胞为阳性，可认为是纯神经元培养［3］. 1.2.4类缺血模型建立细胞培养基换为不含糖的人工脑脊液ngACSF，温度保持在(30±2)℃，混合气体换为920mL・L-1N2/80mL・L-1CO2. 1.2.5实验分组缺血组(对照组)：按类
8、缺血模型处理5和10min.实验组：给予30μmol・L-1丹曲林钠（Sigma公司）孵育10~15min后，类缺血处理5
