阿米替林对缺血损伤神经元bcl2和bax表达的影响

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1、阿米替林对缺血损伤神经元bcl2和bax表达的影响【摘要】研究阿米替林(Ami)对缺血损伤神经元bcl?2和bax表达的影响。方法分离培养15～18d胎龄的大鼠神经细胞，用连二亚硫酸钠消除培养基中的氧合并培养基缺糖模拟细胞缺血性损伤，测定乳酸脱氢酶、一氧化氮、谷胱甘肽过氧化物酶的含量变化，观察缺氧缺糖对神经细胞的损伤及Ami的保护作用，并使用Hoechst33342荧光染色法、免疫细胞化学染色法观察Ami对原代神经细胞的抗凋亡作用。结果缺氧缺糖引起神经细胞明显损伤性变化，存活率下降，凋亡率升高，培养上清液中乳酸脱氢酶、一氧化氮含量升高，谷胱甘

2、肽过氧化物酶水平显著降低，促进缺氧神经细胞产生bcl?2，并减少bax的产生。Ami10-7～10-5mol·L-1能不同程度地减轻上述损伤性变化。结论Ami对神经细胞“缺血”性损伤有保护作用，其抗凋亡机制可能与增加bcl?2表达，下调bax表达有关。【关键词】阿米替林神经细胞缺氧凋亡【Abstract】ObjectiveTostudytheeffectsofamitriptyline(Ami)onexpressionofbcl?2andbaxinratsneuronsafteranoxia.MethodsTheinjurymodelofcu

3、lturedneuronsadebytheadministrationofsodiumdithioniteandglucose?deprivedEarle’ssolution.TheprotectiveeffectsofAmiinvitroanalyzediningthecontentofnitricoxide(NO)byGriessreagentandtheactivitiesoflactatedehydrogenase(LDH)andglutathioneperoxidase（eGSH?Px）byLDHandGSH?Pxkits,resp

4、ectively.Theanti?apoptosiseffectofAmionprimaryculturedneuronsethodsofHoechst33342stainingandimmunocytochemistry.ResultsAmi(10-7，10-6，10-5mol·L-1)droppedapoptosisrateofcerebralcorticalneuronsinducedbyhypoxia,increasedbcl?2proteinexpressionanddecreasedbaxproteinexpression.Con

5、clusionTheresultssuggestthatAmiisabletopreventhypoxicneuronsfromapoptosisinprimaryculturedcerebralcorticalneurons.Theeffectofanti?apoptosisisthroughup?regulationofbcl?2proteinexpressionanddoitriptyline，neuron，hypoxia，apoptosis脑缺血损伤不仅可以引起神经元急性坏死，还可以导致迟发性神经元损伤。神经元损伤涉及多种因素，微循环

6、障碍导致能量缺乏，氧自由基的大量产生，消耗了细胞中的抗氧化物质，引起或加重了脂质过氧化反应，兴奋性氨基酸释放增多引起细胞钙超载，最终致细胞坏死或凋亡。本研究利用培养大鼠皮层神经细胞，以连二亚硫酸钠（sodiumdithionite）消除培养基中的氧合并培养基缺糖建立神经细胞“缺血”模型，观察其对神经细胞的损伤作用，通过测定培养液中乳酸脱氢酶（lactatedehydrogenase,LDH）活性、一氧化氮（nitricoxide,NO）含量和谷胱甘肽过氧化物酶（glutathioneperoxidase，GSH?Px）含量观察其细胞保护作用，

7、以Hoechst33342荧光染色法、免疫细胞化学染色法观察其抗凋亡作用，并探讨其抗脑缺血作用的机制。1材料与方法1.1材料孕15～18dTT）、Hoechst33342（均为Sigma公司产品）；DMEM高糖培养基、胎牛血清、马血清（均为Gibco公司产品）；连二亚硫酸钠（sodiumdithionite）（天津石英钟厂霸州化工分厂）；盐酸阿糖胞苷（cytarabinehydrochloride）（上海华联制药有限公司）；LDH、NO、GSH?Px试剂盒（均为南京建成生物工程研究所产品）；总蛋白试剂盒（北京中生生物工程高技术公司）；抗兔Ig

8、G二抗ABC试剂盒（华美生物，即用型）；兔抗大鼠bcl?2和bax多克隆抗体（SantaCruzBiotechnology，Inc）。其余试剂均为市售分析纯。HER