米非司酮对人卵巢颗粒细胞Bcl2和Bax表达的影响

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1、浙江大学硕士学位论文米非司酮对人卵巢颗粒细胞Bcl-2和Bax表达的影响浙江大学医学院妇产科学硕士研究生导师中文摘要郭庆云黄丽丽教授背景孕酮是卵巢合成和分泌的主要激素之～，除了作为其它激素的底物，孕酮对于调节排卵和黄素化等生殖事件也是必需的。米非司酮(mifepristone，RU486)是一种炔诺酮衍生物，与孕酮受体和糖皮质激素受体有极强的亲和力。作为抗孕酮药物，米非司酮己被广泛应用于l临床终止早期妊娠。在调节生育方面，米非司酮还有其它可能的应用，如抑制排卵、阻止植入和诱导出血。作为一种可能的避孕药，米非司酮吸引了众多

2、研究者的注意。目前证实，卵泡期服用米非司酮能干扰卵泡生长，抑制排卵，这使米非司酮有可能成为一种不含雌激素的抑制排卵的口服避孕药。但其抑制排卵的确切机制并不清楚。颗粒细胞是成熟卵泡中最大的细胞群，其包围且营养着卵母细胞，支持卵母细胞成熟。另外，颗粒细胞分泌高水平甾体激素，以确保植入所必需的子富内膜感受态的形成及早期胚胎的发育。近来发现，卵巢颗粒细胞凋亡是卵泡闭锁和黄体退化的主要原因。已证实所有脊椎动物卵巢卵泡的闭锁是通过颗粒细胞层的凋浙江大学硕士学位论文亡介导的。这些研究提示，米非司酮有可能通过诱导颗粒细胞凋亡来抑制排卵。

3、有学者研究了米非司酮调节卵巢颗粒细胞凋亡的可能途径，发现米非司酮处理颗粒细胞24h后增加了颗粒细胞Caspase一3的活性。但目前为止，未见米非司酮对卵巢颗粒细胞凋亡的影响及其对凋亡相关基因Bcl-2基因家族表达的影响。本研究拟观察低剂量米非司酮对体外培养的人卵巢黄素化颗粒细胞凋亡及其Bcl一2和Bax蛋白和基因水平表达的影响，探讨米非司酮影响排卵的可能机理。材料和方法人卵巢颗粒细胞来自经超声引导下取卵的体外受精一胚胎移植(IVF-ET)患者。颗粒细胞体外培养244,时贴壁后更换新鲜培养基，并分别加入终浓度为0(即无米非

4、司酮作用一基础状态，为对照组)、2．5、5和10蜊／L的米非司酮继续培养24小时。采用电子显微镜和DNA琼脂糖凝胶电泳观察不同浓度米非司酮对颗粒细胞的形态和生化特征的影响；运用免疫细胞化学法观察不同浓度米非司酮对颗粒细胞中Bcl-2和Bax蛋白表达的影响；逆转录聚合酶链式反应(RT—PCR)法测定不同浓度米非司酮处理后颗粒细胞Bcl一2和Bax的mRNA的表达水平。用One-wayANOVA和Student-Newman-Keuls检验的统计学方法进行处理组与对照组及两两组间数据比较分析，检验水准a=O．05，双侧。所有

5、实验数据采用SPSSl0．0统计软件包进行处理。结果1．体外培养第一个24小时后，颗粒细胞贴壁，平铺生长，胞质富含颗粒，细胞间出现纤维链接。2．不同浓度米非司酮处理颗粒细胞24h后，透射电镜观察显示，米非司酮能诱导颗粒细胞出现染色质边集、胞质浓缩及细胞体积缩小等细胞凋亡所特有的形态学改变。3．不同浓度米非司酮处理颗粒细胞24h后，DNA琼脂糖凝胶电泳发现，与对照组相比，米非司酮各处理组均未出现明显的“梯状条带”。4．免疫细胞化学结果显示，颗粒细胞中Bcl一2蛋白表达随米非司酮处理剂量的增加而减少，处理组与对照组相比及处理

6、组间Bci一2蛋白表达差异具有显著性(P<0．001)；相反，Bax蛋白则随着米非司酮剂量的加大表浙江大学硕士学位论文达增多，且处理组与对照组相比及处理组间Bax蛋白表达差异具有显著性(PO．05)，且各处理组间Bcl一2及Bax的mRNA表达水平也无显著性差异(户>0．05)。结论1．米非司酮能诱导体外培养的人卵巢黄素化颗粒细胞发生凋亡，这可能是其通过抑制排卵发挥避孕功效的作用机制之一。2．调节Bcl一2和Bax蛋白的表

7、达可能是米非司酮诱导颗粒细胞凋亡的途径之一。3．米非司酮可能通过转录后水平调节Bcl一2和Bax蛋白的表达。【关键词】米非司酮：卵巢；颗粒细胞；凋亡；Bcl一2：Bax浙江大学硕士学位论文EffectofmifepristoneontheexpressionofBcl一2andBaxinhumanluteinizinggranulosacellsSchoolofMedicineZhejiangUniversityObstetrics＆GynicologyPostgraduate：GuoQingyunSupervisor：

8、ProfessorHuangLiliABSTRACTBackgroundProgesterone(P4)isoneofthemajorsteroidssynthesizedandsecretedbytheovary．Inadditiontoitsroleasasubstrateforproductionofother