蝙蝠葛酚性碱诱导多药耐药细胞系k562-mdr1凋亡及逆转耐药性的研究

《蝙蝠葛酚性碱诱导多药耐药细胞系k562-mdr1凋亡及逆转耐药性的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、蝙蝠葛酚性碱诱导多药耐药细胞系K562/MDR1凋亡及逆转耐药性的研究：何志一,刘相辉,刚宏林【摘要】目的：探讨蝙蝠葛酚性碱(phenolicalkaloidsfromMenispermumdauricum,PAMD)诱导多药耐药(multidrugresistance,MDR)细胞系K562/MDR1凋亡及逆转耐药性的作用。方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测K562/S及K562/MDR1细胞对不同浓度PAMD的敏感性,并计算半数抑制浓度(IC50)。膜联蛋白V(AnnexinV)异硫氰酸荧光素(FITC)+碘化丙啶(PI)双参数检测细胞凋亡百分率变化,分析在PA

2、MD的作用下,两种细胞对伊马替尼(IM,STI571)敏感性的变化。结果:PAMD可诱导两种细胞凋亡,其低剂量72h时对K562/S和K562/MDR1细胞的凋亡率分别为(10.92±1.03)%和(8.12±0.98)%,并可提高伊马替尼对K562/MDR1的凋亡率。PAMD可显著逆转K562/MDR1细胞对伊马替尼的耐药性,其逆转倍数为2.22。结论:PAMD对K562/S和K562/MDR1细胞具有诱导凋亡作用,同时具有逆转白血病细胞株K562/MDR1多药耐药性、回归靶位的作用。【关键词】蝙蝠葛酚性碱;慢性粒细胞白血病;多药耐药细胞系;凋亡　　[Abstract]O

3、bjective:TostudytheeffectsofphenolicalkaloidsfromMenispermumdauricum(PAMD)oninducingthemultidrugresistance(MDR)celllineK562/MDR1toapoptosisandreversingtheirMDR.Methods:MTTcolorimetricassayployedtodetectthesensitivityofK562/SandK562/MDR1celllinestreatedatimibmesylate(IM,STI571).Results:PAMD

4、caninducetheapoptosisofthetultipleMenispermumdauricum(PAMD);chronicmyelogenicleukemia;multidrugresistancecellline;apoptosis　　多药耐药(multidrugresistance,MDR)是指肿瘤细胞对一种化疗药物产生耐药的同时,对其他结构和作用机制不同的化疗药物也产生交叉耐药的现象,它是导致肿瘤化疗失败的原因之一[1]。克服MDR的方法之一是使用逆转剂,一些具有钙拮抗作用的逆转剂(异搏定、维拉帕米)作用较温和,能在逆转MDR中提高化疗效果,是一类具有很好

5、应用和开发前景的药物。本实验选用具有钙通道阻滞作用的中药蝙蝠葛酚性碱(phenolicalkaloidsfromMenispermumdauricum,PAMD)进行逆转耐药性的研究,以期寻找克服MDR、提高化疗疗效和对耐药肿瘤细胞进行更有效杀伤作用的新型药物。　　1材料与方法　　1.1材料　　1.1.1细胞培养人红白血病敏感细胞株K562/S购自中科院上海细胞所,多药耐药细胞株K562/MDR1由江苏血液研究所陈子兴教授惠赠。两种细胞于含10%小牛血清、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的RPMI1640培养基中,在37℃、5%CO2饱和湿度培养箱内传代培养。　

6、　1.1.2主要试剂与仪器蝙蝠葛酚性碱由黑龙江中医药大学药学院王栋教授提供,RPMI1640培养基(Gibco公司),小牛血清(杭州四季青生物材料工程公司),四甲基偶氮唑蓝(MTT,Sigma公司),二甲基亚砜(DMSO,北京化工厂);酶标仪(DG3022,华东电子管厂),EPICSXL型流式细胞仪(BeckmanColuter公司);膜联蛋白V(AnnexinV)-异硫氰酸荧光素(FITC)和碘化丙啶(PI)试剂盒购于BDPharmingen公司。　　1.2方法　　1.2.1流式细胞术(FCM)检测细胞的凋亡百分率取对数生长期的K562/S和K562/MDR1细胞,调整

7、细胞的初浓度,实验组分别加入PAMD至终浓度为40,20,10,5,2.5,1.25,0.625mg/L,阴性对照组加入等体积的RPMI1640培养基。置37℃、5%CO2培养箱培养72h,收集细胞,用预冷的1×PBS洗2次,每管用1×结合缓冲液把细胞调整成1×106浓度,每管取100μl加入5μl的AnnexinVFITC溶液进行染色,轻轻混匀,再加入5μl的PI溶液染色,双染后在室温避光静止15min后每管再加入1×结合缓冲液400μl,在1h内上流式细胞仪进行凋亡检测。凋亡后继发坏死细胞既有膜生化改变又有膜