盐酸千金藤碱逆转肿瘤多药耐药性的作用及其机制

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1、Athesis(dissertation)submittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofDoctorTheMultidrugResistanceReversedeffectofCepharanthineHydrochlorideanditsMechanismByLiHanSupervisor：Prof．QingduanWangPharmaceuticalChemistrySchoolofPharmaceuticalSciencesMarch2013原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究

2、所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：韩五日期：矽侈年∥月B日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本

3、人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：互日期：砂届年6月侈日摘要盐酸千金藤碱逆转肿瘤多药耐药性的作用及其机制博士研究生导师郑州大学药学院韩立王庆端研究员450052目前，临床肿瘤的化学治疗仍然是主要的治疗方法之一。但随着化疗药物的大量应用，临床肿瘤患者产生多药耐药性(multidrugresistance，MDR)越加严重，直接影响临床肿瘤病人的治疗效果，其中多药耐药基因MDRl编码的P糖蛋白(P．glycoprotein，P．gP)过度表达是MDR的重要机制之一

4、。鉴于此，寻找肿瘤MDR逆转剂，提高肿瘤对化疗的敏感性，是医药学界当前亟待解决的问题。国内外虽然发现了一些逆转MDR的化合物，一部分已经进入了I／II期临床研究，但多数都由于毒副作用较大，限制了其临床应用。因此，研发低毒、高效的逆转MDR药物尤为重要。盐酸千金藤碱(cepharanthinehydrochloride，CH)是从千金藤属植物中提取分离的一种单体化合物，经半合成而获得。本课题组前期研究证实CH逆转MDR涉及多种机制。但国内外尚无CH调控JNK信号转导通路及其体内逆转MDR作用的研究，本课题将对此进行研究，共分三部分：第一部分是在转录水平和蛋白水平研究

5、CH对P．gP表达的信号转导通路调控的机制，为CH进一步开发提供理论和实验依据。第二部分旨在通过检测CH给药前后荷耐药肿瘤小鼠外周血CD8+细胞中P．gp活性的变化，探讨一种在动物模型中评价以P．gp为靶点的耐药逆转剂效果的方法，并考察CH在体内的肿瘤耐药逆转作用，从而为CH或者其他潜在的MDR逆转剂的研究提供科学依据。第三部分首先分析非小细胞肺癌(non．smallcelllungcarcinoma，NSCLC)化疗不敏感患者外周血CD56+细胞中P．gP的表达和功能变化，探讨CD56+细胞作为预测多药耐药指标的可能性，为临床提供一种检测NSCLC化疗耐药的简便

6、方法，然后通过检测CH对外周血CD56+细胞P．gP功能的抑制作用，间接评价其对体内肿瘤细胞P．gP的抑制作用，为CH进一步应用到临床提供科学依据，同时探讨一种以临床肿瘤患者外周血CD56+细胞为替代分析指标，对P．gP抑制剂的逆转效果进行评价的方法。摘要第一部分盐酸千金藤碱逆转肿瘤多药耐药性的信号转导机制研究目的：JNK信号通路与肿瘤MDR的发生及调控删J基因的表达具有密切关系。本研究的目的是观察盐酸千金藤碱在人慢性粒性白血病K562耐多柔比星细胞株K562／ADR中，逆转肿瘤MDR的信号转导机制。方法：采用Westernblot和RT-PCR法分别检；!贝t]

7、CH单用及与JNK抑制剂SP600125合用后，耐药性K562／ADR细胞中P．gP及MD尺JmRNA表达的变化，考察CH对JNK通路的调控；采用Westernblot法检狈tJCH对转录因子C．Jun蛋白表达和磷酸化的影响，考察CH对C．Jun和磷酸化C．Jun的调节作用。结果：1、随着CH浓度的增加(5．0、10．0、20．0laM)，对MD脚mRNA的抑制作用逐渐增强；随着CH(10．0pM)作用时『白J的延长(0、12、24、36和48h)，对P-gP及脚JmRNA的抑制作用逐渐增强；2、CH联合JNK抑制剂SP600125后，CH对P-gp及MDRlmR

8、NA的抑制