大鼠糖尿病视网膜病变模型建立及超微结构观察

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1、大鼠糖尿病视网膜病变模型建立及超微结构观察【摘要】目的建立链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病大鼠视网膜病变模型并观察视网膜微血管及视细胞的超微结构，评价其应用价值。方法选择健康成年雄性清洁型SD大鼠60只，随机分为正常对照组、糖尿病1个月组、糖尿病3个月组、糖尿病6个月组。大鼠一次性腹腔注射STZ诱发糖尿病模型，观察各组大鼠的生理指标，并对糖尿病模型大鼠进行视网膜组织学检查及微血管超微结构观察。结果STZ腹腔注射糖尿病大鼠成模率为100%，死亡率为4.4%。早期糖尿病大鼠视网膜厚度变薄，视细胞数目随月龄增加而逐渐减少。毛细血管内皮细胞水肿，线粒体肿胀。毛细血管基底膜增厚，管

2、腔狭窄，甚至闭塞。视细胞外节膜盘间隙扩大，排列紊乱。内节线粒体水肿，排列不规则。结论STZ诱导的糖尿病大鼠视网膜病变模型成模率高、方法可靠；糖尿病大鼠视网膜病变在发生发展、病理变化等方面与人类糖尿病视网膜病变具有相同或相似的特征，应用此模型可对糖尿病视网膜病变的病理学、发病机制和药物治疗等多方面进行研究。【关键词】糖尿病视网膜病变视网膜超微结构模型动物大鼠［ABSTRACT］ObjectiveToestablishamodelofearlydiabeticretinopathyinratandstudytheretinalultrastructuralchanges.M

3、ethodsSixtyadultmaleSDratsalcontrolgroup(CON),diabetesfor1month(DM1),diabetesfor3months(DM3),diabetesfor6months(DM6).Thediabeticratmodelinedandtheretinalpathologyandultrastructuralchangesstudied.ResultsDiabetesortalityoftheratsethinnerinearlydiabeticrats.Thenumberofvisualcellsbecamedecrea

4、sedalongent.Thecapillaryendothelialcellsandmitochondriabecamesentmembraneofcapillariesbecamethicker.Thereen.Themembranediscspaceofvisualcelloutersegmentitochondriaofinnersegmentsodelinducedbyintraperitonealinjectionofstreptozotocin(STZ)shoilaritiesinthedevelopmentofretinallesionsandultra

5、structuralchangestohumandiabeticretinopathy.1组）、糖尿病3个月组（DM3组）、糖尿病6个月组（DM6组），每组大鼠15只。1.2大鼠糖尿病模型的建立实验组应用STZ（Sigma公司产品）诱发糖尿病。血糖测定使用美国强生Lifescan公司生产的OneTouch血糖仪和标准血糖试纸。用0.001mmol/L柠檬酸盐缓冲液配成10g/L的STZ。实验组大鼠按60mg/kg剂量左下腹腔内注射STZ。72h后取尾血测血糖及尿糖。凡血糖≥16.7mmol/L及尿糖阳性的大鼠定为糖尿病模型。1.3检测指标成模后每周测1次尿糖，每月测1次血

6、糖、24h尿量和体质量。1.4组织学处理各组大鼠饲养到期后，行腹腔麻醉，摘除眼球，环行剪开角膜缘，置40g/L多聚甲醛固定24h，梯度乙醇脱水，石蜡包埋切片。1.5视网膜超薄切片制备及透射电镜观察每组随机选择5只大鼠，行腹腔注射麻醉，摘除眼球，于角膜缘后0.5mm沿赤道方向环行剪开眼球，去除眼前节，将含视网膜的眼杯放入25g/L戊二醛溶液固定2h；显微镜下剥离视网膜，取颞上及颞下视网膜组织，切成1.5mm×2.0mm大小长方形组织块，用PBS缓冲液冲洗，四氧化锇固定2h,梯度乙醇、丙酮逐级脱水后,EPON812浸透包埋。首先切成1mm厚半薄片做光镜定位，然后制备超薄切片，

7、常规醋酸双氧铀、枸橼酸铅染色，用PhilipsEM208s透射电镜观察视网膜毛细血管及视细胞的超微结构。1.6统计学处理实验数据用±s表示，数据由SPSS10.0统计软件包进行处理，统计学分析采用F检验、t检验。2结果2.1实验大鼠情况对照组大鼠每日饮水量少，尿量少，毛色光滑，体质量随周龄增大而稳步增长，实验过程中无死亡大鼠；45只腹腔注射STZ大鼠于72h后，血糖和尿糖均达成模标准。实验组大鼠成模后第2周即出现多饮、多食、多尿等糖尿病症状，体质量减小，DM3组和DM6组各有1只大鼠因消瘦、进食困难死亡。2.2血糖、尿糖、24