猪卵透明带3α重组乳杆菌疫苗的研发制造

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1、猪卵透明带3α重组乳杆菌疫苗的研发制造　　免疫避孕是一种生育期妇女节育的重要措施。常见的免疫避孕抗原有卵细胞表面抗原、精子表面抗原、人绒毛膜促性腺激素β和生殖激素等，这些抗原可能干扰生育期妇女的生殖系统或免疫系统，诱发生殖功能紊乱、免疫失调、自身免疫性疾病等疾病，因此尚需研究新型疫苗。　　乳杆菌（Lactobacillus）是一种革兰阳性的无芽胞需氧菌，一般呈细长的杆状，大小为（0.5~1）μm（2~10）μm.常成双或短链状排列。常见菌株有干酪乳杆菌（L.casei）、嗜酸乳杆菌（L.acidophilus）、植物乳杆菌（L.plan

2、tarum）和约氏乳杆菌（L.johnsonii）等，常用于食品和饲料加工业，在功能食品、医疗保健和微生态制剂等方面具有广阔的应用前景，是一种极具开发价值的疫苗载体[1~3],本研究拟就乳杆菌介导的猪卵透明带3α抗原和人绒毛膜促性腺激素β疫苗的构建及其作用机制等方面的研制现状进行综述。　　1大肠埃希菌-乳杆菌穿梭载体的构建　　乳杆菌的细胞壁厚而且复杂，摄取外源DNA较为困难，Kim等[4]用电穿孔方法进行外源DNA转化乳杆菌的试验，并摸索出了较好的转化条件，这为构建重组乳杆菌疫苗提供了有利条件。　　为了将外源DNA有效引入乳杆菌，需构建

3、大肠埃希菌-乳杆菌穿梭表达载体，乳杆菌的穿梭表达载体通常有组成型和诱导型两种类型。Guchte等[5]构建的pMG36e是一种常见的组成型表达载体。它含有p32启动子及其下游部分的开放阅读框、来自pUC18的多克隆位点和来自PrtP基因的转录终止子、pIU/mL）;同时将1010CFU疫苗经阴道接种和灌胃分别免疫BALB/c鼠和C57BL/6鼠，在初次免疫后3周加强1次，在初次免疫后4周发现免疫鼠的脾细胞明显增殖，在初次免疫后4~8周发现免疫鼠的子宫和阴道冲洗液均存在IgG分泌细胞以及IgA分泌细胞，提示该疫苗可诱导小鼠产生一个有效的黏膜和体液免疫应答。　　

4、3.2hCGβ-C3d3Dempsey等[22]认为补体片段C3d可增加靶抗原的免疫原性，C3d3是3个拷贝的C3d,与抗原共价结合后可选择性增强宿主的体液免疫应答。姚晓英等[23,24]以phCMV1-hCGβ-C3d3为模板扩增hCGβ-C3d3的编码基因，插入pILac得pI-Lac-hCGβ-C3d3;将其电穿孔转化干酪乳杆菌CECT5276株，0.5%乳糖诱导24h,SDS-PAGE证实重组菌表达分子量为220kDa的hCGβ-C3d3融合蛋白；将1010CFU疫苗经阴道分别接种BALB/c鼠和C5

5、7BL/6鼠，在初次免疫后3周加强1次，在初次免疫后2~8周发现免疫鼠的血清和阴道冲洗液IgG和IgA升高，脾、子宫和阴道的淋巴细胞增殖，阴道和子宫的抗体分泌细胞的数目显着增多，提示该疫苗同样可诱导小鼠产生一个有效的黏膜和体液免疫应答。　　El-HefnaLTC-1细胞株是小鼠睾丸间质肿瘤细胞系，可表达hCG受体，在hCG刺激下可分泌孕酮。icrobiol,2007,19（1）:118-120.（inChinese）徐义刚，崔丽春。乳酸菌作为基因工程受体菌的研究展望[J]中国微生态学杂志，2007,19（1）:118-120.　　[2]MercenierA,

6、AloufHM,GrangetteC.Lacticacidbacteriaaslivevaccines[J].CurrIssuesMolBiol,2000,2（1）:17-25.　　[3]SeegersJFML.Lactobacilliaslivevaccinedeliveryvectors:progressandprospects[J].TrendsinBiotech,2002,20（12）:508-515.